连翘叶茶保肝作用研究

发布时间：2020-04-19 21:58

【摘要】：为了揭示连翘叶作为茶饮抗氧化、保肝及解酒的保健作用以及探寻其作用的物质基础,本文研究了连翘叶红茶、绿茶动物体内保肝作用、体外抗氧化及活性成分。在细胞水平进一步研究了连翘叶红茶、绿茶及其主要活性成分对酒精肝损伤细胞的保护作用。具体研究内容如下:一.整体动物水平上分别研究了:(1)连翘叶红茶急性毒性研究(2)连翘叶红茶对CCl_4肝损伤小鼠的保护作用(3)连翘叶红茶、绿茶对急性酒精中毒小鼠的保护作用(即解酒作用)(4)连翘叶红茶、绿茶对急性酒精肝损伤小鼠的保护作用。(1)连翘叶红茶急性毒性研究表明:单次给予小鼠连翘叶红茶水提取物的最大剂量即38.8g/kg,不会影响小鼠的生长(各组小鼠体重无明显变化P0.05),且对小鼠的脏器没有影响(各组小鼠脏器系数无显著性差异P0.05)。(2)选择CCl_4肝损伤模型观察连翘叶红茶对化学性肝损伤小鼠的作用。结果显示:连翘叶红茶可以有效降低CCl_4肝损伤小鼠血清ALT、AST活性、TBIL含量,升高CAT、GSH活性以及降低小鼠肝脏MDA含量,提高SOD活性;肝脏病理学检测显示除正常(Z)组和连翘叶红茶高剂量(HG)组外,其它各组均见不同程度的肝细胞坏死、炎细胞浸润。其中,阳性(Y)、连翘叶红茶中剂量(HZ)、连翘叶红茶低剂量(HD)三组较模型(M)组病变程度轻。以上结果表明:连翘叶红茶对CCl_4致肝损伤小鼠具有保护作用。(3)以醉酒小鼠翻正反射及血清ADH活性为指标,观察了连翘叶红茶、绿茶的解酒作用。结果表明:预防性给予小鼠连翘叶红茶、绿茶后,连翘叶红茶、绿茶组小鼠的醉酒潜伏期时间均有显著的延长(P0.05),睡眠时间显著的减短(P0.01),醉酒时间缩短(P0.01),量效关系明显;连翘叶红茶、绿茶均能显著升高急性酒精中毒小鼠血清ADH活性(P0.05)。综上,连翘叶红茶、绿茶对急性酒精中毒小鼠均具有保护作用。(4)以小鼠血清、肝脏各项生化指标以及组织病理变化为观察对象,研究了连翘叶红茶、绿茶对急性酒精肝损伤小鼠的保护作用。结果表明:与M组相比,连翘叶红茶、绿茶均能降低急性酒精性肝损伤小鼠血清TG含量、ALT活力,提高血清CAT活力,降低肝脏MDA含量、增强肝脏SOD活力,增强血清及肝脏GSH活性(P0.05);肝组织镜检结果显示,正常小鼠肝脏细胞未见异常,其余组小鼠肝细胞均出现不同程度的肝细胞水样变、脂肪变及肿胀。其中,M组肝细胞损伤程度高于其他组。HG、LG组小鼠部分肝细胞未见异常,肝细胞损伤程度也低于HZ、HD、LZ及LD组。二.系统的研究了连翘叶茶(原叶、绿茶和红茶)的体外抗氧化活性,并进一步探讨连翘叶及其茶抗氧化作用的化学物质基础。采用四种不同体外抗氧化模型,DPPH自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)、总抗氧化能力(FRAP)和亚硝酸盐清除能力比较研究了连翘叶、连翘叶红茶、连翘叶绿茶的体外抗氧化能力;利用福林酚法和NaNO_2-Al(NO_3)_3-NaOH比色法测定了连翘叶及其茶的总多酚和总黄酮含量;HPLC法比较研究了连翘叶及其茶主要成分含量。研究结果表明:连翘叶茶和连翘原叶均表现出较好的抗氧化作用。其中,连翘原叶和连翘叶绿茶的抗氧化能力优于连翘叶红茶,且三者的总多酚、总黄酮含量和它们的抗氧化能力一致。主要化学成分含量测定结果显示,连翘叶红茶与连翘原叶和连翘叶绿茶在化学成分上存在较大差异,其中连翘叶红茶中未检测出连翘酯苷A,连翘苷和芦丁在连翘叶红茶中含量仅是原叶和连翘叶绿茶中的1/7~1/6,而连翘叶红茶中连翘脂素含量约为连翘叶及连翘叶绿茶的42倍。上述结果表明连翘叶和连翘叶绿茶的抗氧化化学物质基础可能为连翘叶中的苯乙醇苷和芦丁等总多酚类物质。而连翘叶红茶经过发酵,在叶子及连翘叶绿茶中含量极少的连翘脂素在连翘叶红茶中反而大量生成,成为连翘叶红茶的主要活性物质之一。三.以细胞生存率、细胞培养液TG含量、ALT和ADH活性为指标,研究了连翘叶红茶、绿茶、连翘叶红茶大孔树脂乙醇洗脱组分(H-20、H-40、H-60、H-80)以及连翘叶茶主要活性成分(连翘酯苷A、连翘苷、芦丁、连翘脂素)对酒精肝损伤细胞的影响,分析连翘叶红茶、绿茶对酒精肝损伤细胞保护作用的物质基础。结果表明:连翘叶红茶、绿茶能提高酒精肝损伤细胞的生存率,同时降低酒精肝损伤细胞培养液ALT活力,亦具有降低培养液TG含量、升高ADH活性的趋势,对酒精肝损伤细胞起到了保护作用,与体内动物实验结果一致。进一步对连翘叶红茶大孔树脂乙醇洗脱组分进行了研究,发现H-20、H-40、H-60和H-80均能提高酒精肝损伤细胞的生存率,均有降低酒精肝损伤细胞培养液ALT活力、TG含量和升高ADH的趋势,且组分H-80保护酒精肝损伤细胞的作用略优于其余三个组分。而组分H-80的主要化学物质为木脂素类化合物,这也说明木脂素类化合物为连翘叶红茶的主要活性物质。接着对连翘酯苷A、连翘脂素、芦丁和连翘苷作了同样的研究,结果表明四个活性成分均表现出一定保肝作用,但是差异不显著。本文从动物体内、体外(分子及细胞水平)系统的研究了连翘叶红茶、绿茶的抗氧化和解酒保肝作用,同时研究了其功效的物质基础,为连翘叶红茶、绿茶的合理开发利用提供了科学的理论依据。
【图文】：

显著性差异,连翘叶,卡门,红茶

图 3.1 不同剂量 CCl4对小鼠肝脏的影响表 3.2 连翘叶红茶不同剂量对小鼠血清 ALT、AST 的影响(n=7)组别 ALT ASTZ 20.5 ± 5.7 41.2 ± 21.9M 191.0 ±76.0#75.2 ± 14.6#Y (100 mg/kg) 98.1 ± 82.6*66.8 ± 17.3*HG (4.5 g/kg) 180.6 ±33.3 76.5 ± 30.0HZ (1.5 g/kg) 176.5 ± 21.1 63.6 ± 15.9HD (0.5 g/kg) 201.3 ± 19.0 75.0 ± 30.2：表 3.2 中 ALT、AST 为卡门氏单位。#表示与 Z 组相比，具有显著性差异(P＜0.05)；示与 M 组相比，具有显著性差异(P＜0.05)。

翻正反射,小鼠,酒精,对中

图 4.1 是实验中对部分小鼠出现翻正反射的记录。图 4.1 左图是给予酒精后，其中的 3 只小鼠已经出现了翻正反射消失现象，而另外两只也呈深度醉酒状态但翻正反射并未消失。人为将出现翻正反射消失的小鼠摆放成如图4.1右图所示（此为翻正反射消失）。随着时间的推移，小鼠渐渐酒醒，，四肢逐渐有活动的迹象，最终翻转身体为正常的爬行状态（此为翻正反射恢复）。灌胃酒精后，M 组和 Y 组小鼠醉酒潜伏期明显短于给药组。进入睡眠后（翻正反射消失），M 组睡眠深度明显高于连翘叶红茶、绿茶组，且连翘叶红茶、绿茶剂量越高小鼠越不容易入睡（即 M 组与 Y 组小鼠在有外界声音等干扰时，基本没有反应，而连翘叶红茶、绿茶组小鼠在外界声音等干扰时出现明显活动趋势，且剂量越高活动趋势越明显）。
【学位授予单位】：山西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】