刺蒺藜对SK-Mel-23细胞黑素代谢调控的研究

发布时间：2020-04-20 07:27

【摘要】：目的研究刺蒺藜不同浓度对人黑色素瘤SK-Mel-23细胞黑素代谢的影响,并探讨刺蒺藜调节色素代谢的分子机制。方法以刺蒺藜水提取物为实验药物,人黑色素瘤SK-Mel-23细胞为模型,实验分为刺蒺藜组、H-89+刺蒺藜组、空白对照组,MTT法检测SK-Mel-23细胞活性,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,Western Blot法检测蛋白表达。结果1.刺蒺藜组对黑素代谢的影响和作用机制1.1对细胞活性的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后,均对细胞活性有统计学意义(F=19.623,P0.001;F=5.49,P0.01;F=2.04,P0.01),在低浓度的时促进细胞活性,随着浓度增加呈抑制作用。1.2对黑素合成的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后,均对黑素合成有统计学意义(F=11.927,P0.001;F=9.03,P0.001;F=16.5,P0.001),在低浓度时对黑素合成呈抑制作用,随着浓度增加呈促进作用。1.3对酪氨酸酶活性的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞24、48、72小时后,对酪氨酸酶活性有统计学意义(F=5.74,P0.001;F=3.97,P0.001;F=21.55,P0.001),低浓度的时对SK-Mel-23细胞酪氨酸酶活性呈抑制作用,随着浓度增加呈促进作用。1.4对蛋白表达的影响不同浓度刺蒺藜作用SK-Mel-23细胞48h后,与对照组比对TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的影响有统计学意义(F=23.97,P0.001;F=11.37,P0.001;F=1.53,P0.05;F=2.67,P0.05),低浓度的时候抑制蛋白表达,随着浓度增加促进蛋白表达。2.H-89+刺蒺藜组对黑素代谢及蛋白表达的影响2.1对黑素合成的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h,不同浓度组与加入H-89对照组比对黑素合成的影响无统计学意义(F=0.683,P=0.61),不同浓度组与不加入H-89对照组比对黑素合成的影响有统计学意义(F=2915,P0.001)。2.2对酪氨酸酶活性的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h,不同浓度组与加入H-89对照组比对酪氨酸酶活性的影响无统计学意义(F=0.416,P=0.822),不同浓度组与不加入H-89对照组比对酪氨酸酶活性的影响有统计学意义(F=354.9,P0.001)。2.3对蛋白表达的影响H-89处理后加入刺蒺藜培养48h,各浓度组与加H-89对照组对比对TYR、TRP-1、MITF、p-CREB表达无统计学意义(F=2.499,P=0.9;F=3.062,P=0.89;F=0.76,P=0.61;F=0.89,P=0.51),蛋白的表达不随浓度的改变而变化,各浓度组与不加H-89对照组对比对蛋白表达有统计学意义(F=7.324,P0.05;F=2.927.P0.05;F=10.41,P0.01;F=7.233,P0.001)。讨论本实验证实刺蒺藜能双向调节色素代谢,实验最佳时间为48h。刺蒺藜在低浓度时对细胞活性有抑制作用,在高浓度时对细胞活性有促进作用;对黑素合成和酪氨酸酶活性呈相反作用,其作用机制可能是在低浓度时抑制TYR、TRP-1、MITF、p-CREB蛋白的表达,而在高浓度时促进蛋白的表达。加入PKA通路抑制剂后刺蒺藜不同浓度对色素代谢基本无改变,说明刺蒺藜是通过调控cAMP/PKA通路来调控色素代谢的。
【图文】：

８．１８ｍｇ／ｍｌ时呈现促进作用，而４８小时阶段和７２小时时间阶段分别在浓度为逡逑４．０９ｍｇ／ｍｌ和２．０５ｍｇ／ｍｌ时呈现促进作用，三个时间阶段均在浓度为１６．３７ｍｇ／ｍｌ逡逑时对细胞酪氨酸酶活性的促进作用最强。由图３可知，在促进酪氨酸酶活性的逡逑浓度中，７２小时的促进作用在趋势上要优于２４小时，两者在１６．３７ｍｇ／ｍｌ浓度逡逑２４逡逑

２结果逡逑２．１黑素合成结果逡逑由表４和图４可知，，Ｈ－８９＋刺蒺藜组与只加入Ｈ－８９对照组相比对黑素合成逡逑的影响无统计学意义ＣＦ＝０．６８３，邋ｉＭ）．６１），Ｈ－８９＋刺蒺藜组与只加入Ｈ－８９的对逡逑照组对黑素合成无明显差异，各浓度组之间也无明显差异。Ｈ－８９＋刺蒺藜组、只逡逑加入Ｈ－８９对照组与不加入Ｈ－８９对照组相比比对黑素合成的影响有统计学意义逡逑（Ｆ＝２９１５，邋Ｐ＜０．００１），与只加入培养基而无加入Ｈ－８９的对照组相比，Ｈ－８９＋逡逑刺蒺藜组与只加入Ｈ－８９对照组对黑素合成有显著差异，均对黑素合成减少。在逡逑刺漠藜实验浓度相同时，刺漠藜组和刺蒺藜＋Ｈ－８９组及两组的对照组之间的黑逡逑素合成对比见图４，邋Ｈ－８９＋刺蒺藜组中不同浓度组的黑素合成明显低于刺蒺藜逡逑组。逡逑表４Ｈ－８９＋刺蒺藜组对ＳＫ－Ｍｅｌ－２３细胞黑素代谢的影响Ｃ邋ｉ±ｓ，邋ｎ＝３）逡逑浓度逦黑素合成逡逑１．０２ｍｇ／ｍｌ逦９８．８４１±１．５２７＊＊＊逡逑２．０５ｍｇ／ｍｌ逦９９．４１２±２．１２１＊＊＊逡逑４．０９ｍｇ／ｍｌ逦１００．７７Ｕ１．７７９＊＊＊逡逑８．１８ｍｇ／ｍｌ逦９９．８０１ｉ０．８９４＊＊＊逡逑１６．３７ｍｇ／ｍｌ逦１００．１９３±２．９６＊＊＊逡逑对照组逦１００±０．００＊＊＊逡逑不加邋Ｈ－８９逦３３３．９１４±３．５９２逡逑注：ｎ＝３；与对照相比＊b6＜０．邋０５
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285

【参考文献】

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本文编号：2634322