【摘要】：目的:通过蛇菰多糖对脊髓损伤大鼠模型进行治疗,观察并比较治疗后脊髓运动神经元组织形态的变化,并检测相应的自噬相关蛋白,探讨蛇菰多糖对脊髓损伤的保护作用机制是否通过激活细胞自噬而产生。方法:实验选取150只SD雄性大鼠,随机分为假手术组、模型组、蛇菰多糖治疗组。随后,对模型组和假手术组每天给予2ml生理盐水灌胃,蛇菰多糖治疗组分别给予低、中、高三个不同剂量的蛇菰多糖溶液(分别为25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)灌胃治疗。最后,采用行为学BBB评分来评价蛇菰多糖对脊髓损伤的治疗效果。采用尼氏染色法观察脊髓损伤后脊髓运动神经元组织形态的变化。采用免疫组织化学染色法检测相应脊髓运动神经元LC3蛋白的表达情况;Western Blotting检测相应自噬相关蛋白Beclin 1、LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达。结果:1 BBB评分结果:假手术组在不同时间段BBB评分均趋近于正常分值;蛇菰多糖治疗组与模型组相比较,其中高剂量组在术后3、7天时的评分均高于模型组(p0.05),中剂量组在术后7天时高于模型组(p0.05)。低剂量组与模型组无差异(p0.05)。2尼氏染色结果:假手术组尼氏小体颗粒数量比较多,且均匀的分布在细胞质中,着色呈现为深紫色,神经元形态较完好。与假手术组相比,模型组各个时间段的脊髓神经元形态均不完整,而且细胞间隙增大,神经元胞体皱缩,着色亦浅淡,神经元数量明显减少。与模型组相比,蛇菰多糖治疗组病理改变优于模型组中,蛇菰多糖治疗组胞质崩解相对较少,着色相对较深,神经元形态尚可,神经元数量相对增多。3免疫组化结果:与假手术组相比较,模型组在术后1、3、7天三个时间段脊髓运动神经元中LC3蛋白阳性细胞数明显增多,差异具有显著性统计学意义(p0.01)。蛇菰多糖治疗组与模型组相比较,其中高剂量组在术后1、3、7天时脊髓运动神经元中LC3蛋白阳性细胞数均高于模型组(p0.05),中剂量组在术后3、7天时高于模型组(p0.05);低剂量组与模型组无差异(P0.05)。4 Western Blot结果:1天时,与假手术组比较,模型组脊髓组织中Beclin 1蛋白的表达明显降低,p62和LC3-Ⅱ蛋白的表达明显升高,且差异具有显著性统计学意义(p0.01)。蛇菰多糖治疗组与模型组相比较,高剂量组脊髓组织中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表达均高于模型组(p0.05),中、高剂量组脊髓组织中p62蛋白的表达均低于模型组(p0.05);低剂量组中Beclin 1、LC3-Ⅱ、p62蛋白的表达与模型组之间均无差异(p0.05)。3天时,与假手术组比较,模型组脊髓组织中Beclin 1蛋白的表达降低,p62和LC3-Ⅱ蛋白的表达相对升高,且差异具有显著性统计学意义(p0.01)。蛇菰多糖治疗组与模型组相比,低、中、高剂量组脊髓组织中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表达均高于模型组,其中低、中剂量组差异具有统计学意义(p0.05),高剂量组具有显著性统计学意义(p0.01);蛇菰多糖中、高剂量组脊髓组织中p62蛋白的表达均低于模型组,其中中剂量与模型组比较,差异具有统计学意义(p0.05),高剂量组具有显著性统计学意义(p0.01),低剂量组与模型组无差异(p0.05)。7天时,与假手术组比较,模型组脊髓组织中Beclin 1蛋白的表达相对降低,p62和LC3-Ⅱ的表达仍然升高,且差异具有显著性统计学意义(p0.01);蛇菰多糖治疗组与模型组相比,低、中、高剂量组脊髓组织中Beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白的表达均高于模型组,中剂量组与模型组相比较,差异具有统计学意义(p0.05),高剂量组具有显著性统计学意义(p0.01),低剂量组中LC3-Ⅱ蛋白表达亦具有统计学意义(p0.05);蛇菰多糖低、中、高三个剂量组脊髓组织中p62蛋白的表达均低于模型组,低、中剂量组与模型组比较,差异具有统计学意义(p0.05),高剂量组具有显著性统计学意义(p0.01)。结论:蛇菰多糖对脊髓损伤后神经元具有保护作用,其机制可能与增强脊髓组织中Beclin 1和LC3-II蛋白,同时降低p62蛋白的表达而增强细胞自噬水平的机制有关。
【学位授予单位】：湖北民族学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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2634414
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