葫芦素B固体分散体的制备及大鼠体内药代动力学研究

发布时间：2020-04-20 10:21

【摘要】：葫芦素B是从葫芦科植物甜瓜瓜蒂中提取得到的一种高度氧化的四环三萜类化合物,其难溶于水,且在胃、肠道内的吸收差,生物利用度低。为提高葫芦素B的溶出度,改善其生物利用度,本研究应用固体分散技术,以泊洛沙姆407为载体,采用溶剂法制备固体分散体;通过扫描电镜法、差示扫描量热法、粉末X-射线衍射法、傅里叶红外光谱法等手段进行物相鉴别,并比较固体分散体、物理混合物和原料药的溶出度;以大鼠为实验动物,进行了葫芦素B固体分散体与原料药的药代动力学,探讨主要药代动力学参数间的差异。目的:建立葫芦素B体外溶出试验的方法;建立UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中葫芦素B含量的分析方法;采用溶剂法制备固体分散体,并进行物相鉴别及溶出度测定;研究葫芦素B固体分散体的药代动力学。方法:1.UV法测定葫芦素B原料药及其在固体分散体中的含量和HPLC法测定葫芦素B固体分散体在水中的溶出度,并进行方法学考察;通过对溶出介质、转速等条件的考察,筛选葫芦素B固体分散体的溶出试验条件。2.UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中葫芦素B含量的分析方法:质谱条件的优化,生物样品前处理方法;方法学考察:线性范围,精密度与准确度,回收率,基质效应和稳定性。3.葫芦素B绝对生物利用度的测定:以大鼠为实验动物,分别注射和灌胃给予葫芦素B,应用UPLC-MS/MS法测定不同时间点的大鼠血浆中葫芦素B含量,采用DAS 3.2.8软件计算主要的药代动力学参数,并计算葫芦素B的绝对生物利用度。4.通过结晶抑制试验、溶解度试验进行固体分散体载体的筛选;采用溶剂法制备固体分散体,单因素法筛选载药比例和制备用溶剂。5.应用扫描电镜法、差示扫描量热法、粉末X-射线衍射法、傅里叶红外光谱法对葫芦素B固体分散体进行物相鉴别;应用溶出度试验对葫芦素B固体分散体、物理混合物与原料药的溶出度进行考察。6.葫芦素B固体分散体药代动力学的研究:以大鼠为实验动物,分别单次灌胃给予葫芦素B原料药和固体分散体,不同时间点眼眶取血,采用UPLC-MS/MS法测定葫芦素B在血浆中的浓度,绘制血药浓度-时间曲线,采用DAS 3.2.8拟合主要的药代动力学参数,计算相对生物利用度,并比较葫芦素B固体分散体与原料药的药代动力学参数的差异。结果:1.采用UV方法进行含量测定,检测波长为228 nm,葫芦素B的线性范围是3.84~32.64μg/mL,线性回归方程为A=0.0255C+0.0799,相关系数r=0.999;精密度RSD=3.59%;低、中、高三种浓度的样品平均回收率分别为99.38%、99.21%、100.20%;样品24 h内稳定。采用HPLC方法进行溶出度的测定,葫芦素B的线性范围是0.27~3.78μg/mL,线性回归方程为Y=24070.4X+710.9,相关系数r=0.9999;低、中、高三种浓度样品的精密度RSD分别为3.78%、3.19%、2.66%;低、中、高三种溶出样品的平均回收率分别为97.57%、100.64%、99.26%;样品24 h内稳定。葫芦素B固体分散体的溶出条件:水为溶出介质,桨法,转速100 r/min,温度37℃。2.采用UPLC-MS/MS法测定血浆中葫芦素B的含量,血浆中葫芦素B的线性范围是0.05~1000 ng/mL,线性回归方程为:Y=15801.4X+3365.1,相关系数r=0.9996,最低定量限为0.05 ng/mL;LLOQ样品的平均准确度为110.67%,精密度RSD=5.32%;QC样品的平均准确度分别为98.17%、104.50%、99.67%,精密度RSD分别为4.66%、5.44%、5.52%;葫芦素B的基质效应为94.19~99.42%,IS的基质效应为100.83%;回收率均大于85%;样品稳定性良好。3.葫芦素B的绝对生物利用度为1.37%。4.结晶抑制试验结果表明,泊洛沙姆407对葫芦素B超饱和溶液的抑晶能力明显优于F68、PEG-6000、Soluplus、HPMC E_(30)、PVP K_(90),且泊洛沙姆407能稍增加葫芦素B在水中的溶解度。选择泊洛沙姆407为载体,分别按照1:5、1:7的载药比例,以二氯甲烷为溶剂,采用溶剂法制备葫芦素B固体分散体。溶出45 min时,原料药、物理混合物、1:5固体分散体和1:7固体分散体的溶出度分别为12.92%、30.61%、88.58%、98.34%。5.葫芦素B固体分散体的外观为白色粉末,无结块,无粘连。SEM检测:葫芦素B原料药呈棱柱状晶体,泊洛沙姆407呈不规则团块状,物理混合物中有柱状晶体和不规则的团块状结构,而固体分散体中葫芦素B的晶体结构大部分消失;X-RD检测:葫芦素B原料药在7.0°、13.5°、16.1°、20.5°等处有明显的晶体衍射峰,固体分散体的图谱中葫芦素B的特征衍射峰大部分消失,但仍有部分特征峰存在;DSC检测:葫芦素B和泊洛沙姆407分别在181.75℃和61.31℃处出现吸热峰,物理混合物中出现以上2个特征吸热峰,固体分散体中仅出现泊洛沙姆407的特征吸热峰;FTIR检测:固体分散体的图谱中有葫芦素B的酮基特征峰(1720 cm~(-1)、1695 cm~(-1))及羟基特征峰(3504 cm~(-1)),以及泊洛沙姆的特征峰;根据以上分析推测固体分散体中药物以无定形伴有微晶的形式存在。6.1:5、1:7固体分散体的相对生物利用度分别为268.35%、364.02%。大鼠灌胃给予葫芦素B固体分散体的T_(max)比原料药提前1 h;1:5、1:7固体分散体组的AUC与原料药组比具有显著性差异(P0.05);1:5、1:7固体分散体组C_(max)与原料药组比具有显著性差异(P0.05),且CL_(z/F)和V_(z/F)均比原料药组降低。结论:采用溶剂法制备的葫芦素B固体分散体,能明显提高葫芦素B的溶出度;药代动力学研究表明,固体分散技术能显著提高其生物利用度。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R283.6;R285.5

【参考文献】