薯蓣皂苷在大鼠髓核细胞氧化应激中的保护作用及其机制研究

发布时间：2020-04-20 10:51

【摘要】：目的:研究薯蓣皂苷(Dioscin)对大鼠髓核细胞氧化应激损伤的保护作用;并探讨药物作用的可能机制。方法:提取SD大鼠原代髓核细胞培养至第二代用于实验研究。构建体外髓核细胞过氧化氢诱导氧化应激模型。使用不同浓度的Dioscin和过氧化氢干预髓核细胞,通过CCK8细胞活性检测,确定Dioscin最佳实验浓度并分组实验。Annexin V-FITC/PI流式细胞学技术检测髓核细胞凋亡情况;检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;检测丙二醛(MDA)含量;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;免疫荧光检测细胞内ROS和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)分布;免疫印迹(Western Blot)分析髓核细胞内凋亡调控蛋白(Caspase3、Caspase9和Bax)、炎症介质(INOS、COX2、IL-6)、金属蛋白酶(MMP3、MMP13、ADAMTS4、ADAMTS5)、基质合成代谢因子(Collagen2及SOX9)、通路蛋白(NOX4、p-p65/p65、p-JNK/JNK)的表达情况。结果:本研究发现200u M的过氧化氢可以使髓核细胞的活性降低51%,被用于构建体外大鼠髓核细胞氧化应激模型。浓度范围低于600n M的Dioscin对大鼠髓核细胞无明显毒性,同时200n M的Dioscin可以明显改善过氧化氢导致的大鼠髓核细胞活性下降。Dioscin可以下调凋亡蛋白Caspase3、Caspase9和Bax的表达水平,抑制H_20_2诱导的大鼠髓核细胞的线粒体凋亡。Dioscin通过减少ROS和MDA的生成、增强SOD的活性恢复大鼠髓核细胞内氧化还原平衡。Dioscin抑制过氧化氢诱导的细胞内INOS、COX2、IL-6的水平升高,减轻大鼠髓核细胞的炎症反应损伤。Diosicn可以阻断过氧化氢刺激引起的ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13等基质金属蛋白酶的过表达,同时上调包括Collagen2、SOX9在内的合成因子的蛋白水平。过氧化氢可以诱导NOX4的高表达,而Dioscin通过下调NOX4表达水平,降低NF-κB和JNK通路蛋白的磷酸化,从而抑制NF-κB和JNK通路的激活。结论:本研究表明,髓核细胞在氧化应激下可以通过激活Nox4/NF-κB/JNK通路促进炎症介质的释放,上调椎间盘基质分解代谢因子并导致基质分解过度,最终加速椎间盘的退变。Dioscin可以抑制ROS生成,重建髓核细胞内的氧化与抗氧化平衡,改善髓核细胞内的炎性环境,保护髓核细胞免于氧化应激损伤。因此,Dioscin在椎间盘退变中具有潜在的治疗前景。
【图文】：

17图 1：Dioscin 及 H2O2对大鼠髓核细胞活性的影响。（A）不同浓度的 H2O2（0、100uM、200uM、300uM、400uM）对大鼠髓核细胞活性的影响；（B）不同浓度的 Dioscin（0、100nM、200nM、400nM、600nM、800nM）对大鼠髓核细胞的毒性；（C）不同浓度的 Dioscin 对 H2O2干预下大鼠髓核细胞活性的保护作用。##，，p ＜ 0.01（vs 对照组）；**，p ＜ 0.01（Dioscin 组 vs H2O2组）

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文图 3：Dioscin 对大鼠髓核细胞内 ROS、MDA 及 SOD 表达水平的影响不同干预条件下大鼠髓核细胞内活性氧（ROS）的流式检测；（B）大鼠胞内 ROS 表达水平的定量分析；（C）ROS 在大鼠髓核内分布情况的免检测；（D）大鼠髓核细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性检测；（F）核细胞内丙二醛（MDA）的表达情况。## 表示 p ＜ 0.01（相比于对照** 表示 p ＜ 0.01（Dioscin 组与 H2O2组比较）。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 郑力峰;叶君健;郑佑相;林建华;;胰岛素样生长因子-1对骨髓间充质干细胞分化类髓核细胞的作用[J];解剖学杂志;2015年02期

2 刘玉端;于占革;;髓核细胞表型对干细胞治疗椎间盘退变的意义[J];医学综述;2017年09期

3 任国梁;牛建鹏;任龙韬;王祺;;退变髓核细胞拉伸实验的形态学研究[J];中国医学创新;2015年06期

4 阳普山;王德利;刘子双一;吴剑宏;阮狄克;;髓核细胞鉴定的研究进展[J];脊柱外科杂志;2014年02期

5 董俊文;李浩鹏;;髓核细胞鉴定方法的相关研究进展[J];中国脊柱脊髓杂志;2012年09期

6 牛建鹏;卫陈刚;任龙韬;;髓核细胞及其生物力学研究进展[J];临床医药实践;2011年08期

7 蓝蔚仁;潘赛;孙超;李海音;蒋长青;周跃;李长青;;大鼠髓核细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的作用研究[J];中国脊柱脊髓杂志;2019年01期

8 梁伟国;叶冬平;戴丽冰;沈雁;;体外培养人正常椎间盘髓核细胞与退变髓核细胞的生物学性状比较:可以为干预退变髓核细胞提供最佳时机吗?[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年28期

9 韩成龙;姜超;;骨髓间充质干细胞向髓核细胞的转化[J];中国矫形外科杂志;2009年19期

10 邱匀峰;吴小涛;赵梓汝;王运涛;;骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养的实验研究[J];东南大学学报(医学版);2007年04期

相关会议论文 前10条

1 赵秀宝;马信龙;马剑雄;李稚君;李爽;孙晓雷;;周期性牵张力联合灌注培养对大鼠髓核细胞影响的研究[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年

2 陈琪;杨曦;刘立岷;宋跃明;;兔髓核细胞自然传代培养退变模型的构建[A];2016年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2016年

3 单治;林贤丰;李生捚;范顺武;赵凤东;;可注射猪小肠黏膜下层微粒复合髓核细胞的脱细胞材料治疗椎间盘退变[A];2015年浙江省骨科学学术年会论文汇编——基础与骨病学组专题[C];2015年

4 王会仁;董健;周晓岗;李熙雷;林红;;人脂肪及骨髓来源间充质干细胞与髓核细胞非接触共培养后的类髓核分化效应研究[A];第十九届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2012年

5 梁伟国;叶冬平;戴丽冰;陈鸿辉;;bFGF对人退变椎间盘髓核细胞影响的实验研究[A];第20届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2011年

6 李熙雷;幸嵘;周晓岗;林红;董健;;骨骼退变再生过表达GDF-5人诱导多功能干细胞的体外髓核样细胞分化实验研究[A];2019楚天骨科高峰论坛暨第二十六届中国中西医结合骨伤科学术年会论文集[C];2019年

7 余磊;廖华;熊绍虎;;人髓核细胞体外培养体系的建立[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

8 梁伟国;叶冬平;戴丽冰;陈鸿辉;;BMP-2对人退变椎间盘髓核细胞影响的实验研究[A];第20届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2011年

9 王海强;;CK8在退变椎间盘髓核细胞中的表达[A];中国中西医结合学会脊柱医学专业委员会第六届学术年会论文集[C];2013年

10 李长青;周跃;罗刚;张传志;;仿生髓核组织工程支架材料对体外培养髓核细胞合成代谢的影响[A];第八届全国脊柱脊髓损伤学术会议论文汇编[C];2007年

相关博士学位论文 前10条

1 柴星宇;MiR-486-5p靶向FOXO1抑制人椎间盘退变的机制研究[D];山东大学;2019年

2 王伟;miR-199在退变椎间盘髓核细胞中的表达及作用调控机制研究[D];河北医科大学;2019年

3 张晗祥;SDF1及其相关信号通路在退变椎间盘血管化中的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2019年

4 张象;BMP9介导人退变髓核细胞维持软骨样特性的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2019年

5 杨召;质子感知受体调控人髓核细胞凋亡机制研究[D];天津医科大学;2018年

6 赵磊;程序性坏死在氧化应激诱导髓核细胞死亡中的作用及机制研究[D];华中科技大学;2018年

7 林辉;线粒体自噬在压力诱导髓核细胞程序性坏死中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2018年

8 王琨;血管生成素2调控椎间盘退行性改变的机制研究[D];华中科技大学;2018年

9 袁斌;脂联素在髓核细胞中的表达及其在椎间盘退变炎症反应中的作用机制研究[D];第四军医大学;2017年

10 石健;人骨形态发生蛋白-7基因转染对原代培养兔髓核细胞生物学活性的影响[D];第二军医大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 王杰栋;薯蓣皂苷在大鼠髓核细胞氧化应激中的保护作用及其机制研究[D];华中科技大学;2019年

2 蓝海洋;锌指蛋白A20对内毒素刺激时人椎间盘髓核细胞炎症及退变的影响[D];重庆医科大学;2019年

3 武振方;基于Miyazaki分级颈椎间盘内髓核细胞的生物学特性研究[D];南京大学;2019年

4 张寰;MiR-503在IL-1β诱导人椎间盘髓核细胞外基质降解中的作用研究[D];昆明医科大学;2018年

5 刘沪U

本文编号：2634465