【摘要】：精索静脉曲张(Varicocele,VC)是一种血管病变,指精索内蔓状静脉丛的异常扩张、伸长和迂曲,可导致疼痛不适及进行性睾丸功能减退,是男性不育症的常见诱因之一。近年来研究表明生殖激素的调控及细胞凋亡对生精细胞的影响是VC诱发生精功能障碍的重要因素。临床上运用通脉方治疗VC性不育症取得较好疗效,可有效改善因VC引起的精液质量下降。为进一步探究通脉方治疗VC的机制,开展本实验研究。目的:探究通脉方对VC大鼠血清激素水平的调节及生精细胞凋亡的调控,评价通脉方对VC模型大鼠睾丸生精功能的修复作用。方法:先将72只7周SD雄性大鼠随机分为空白对照组12只和造模组60只,参考Turner经典造模法,并运用显微外科器械结扎性腺静脉,减少侧支循环建立VC模型。术后30d,再将造模组大鼠随机分为5组:模型对照组、迈之灵组、通脉方低剂量组、通脉方中剂量组和通脉方高剂量组,每组各12只。分组后开始对各组大鼠灌胃给药,给药体积为1mL/100g体重。迈之灵组大鼠灌胃给予迈之灵水溶液,给药剂量为5.4mg/kg体重,相当于临床用药剂量;通脉方低剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液,给药剂量为5.45g/kg体重,相当于临床用药剂量1/2;通脉方中剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液,给药剂量为10.89g/kg体重,相当于临床用药剂量;通脉方高剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液,给药剂量为21.78g/kg,体重相当于临床用药剂量2倍。模型对照组、空白对照组按上法灌服等体积的蒸馏水,每日给药一次,共48d。药物干预48d后,将大鼠麻醉,下腔静脉取血,采用放射免疫法测定大鼠血清黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)及睾酮(T)浓度。将双侧附睾组织剪碎,游离出精液,采用WLJY-9000北京伟力彩色精子质量检测系统对大鼠精液进行分析。将睾丸剪成两半,一半进行HE染色观察病理学改变及免疫组化检测 Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表达,另一半用于 WesternBlot检测Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表达。结果:(1)HE染色结果空白对照组:曲细精管边界整齐,未见萎缩和塌陷。间质细胞未见增生,生精小管之间连接紧密,基底膜完整;支持结构丰富,管腔中可见大量成熟精子;模型对照组:睾丸组织可见曲细精管排列紊乱,生精上皮细胞脱落变性,精子少见;间质水肿,间质细胞增生;间质小血管充血,管壁增厚明显,管腔狭窄;通脉方低剂量组:曲细精管排列较有序规整,大小较一致;少量生精上皮细胞脱落变性,精子可见;间质细胞增生,间质水肿,间质小血管偶见充血;通脉方中剂量组:曲细精管排列有序规整,边界整齐,可见各级生精上皮细胞,精子可见;少见间质细胞增生及间质水肿,管壁增厚不明显;通脉方高剂量组:曲细精管排列有序规整,大小较一致,见各级生精上皮细胞,管腔有大量精子;少见间质水肿及间质细胞增生;迈之灵组:曲细精管排列有序规整,大小较一致,精子少见;未见间质水肿,未见间质细胞增生。(2)精子浓度分析表明:与空白对照组比较,模型对照组精子浓度显著降低(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组精子浓度显著改善(P0.05)。(3)精子总活力分析表明:与空白对照组比较,模型对照组精子总活力明显降低(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组精子总活力显著提高(P0.05),迈之灵组精子总活力改善不明显(P0.05)。表明通脉方可改善精子总活力,效果优于迈之灵。(4)血清FSH检测表明:与空白对照组比较,模型对照组FSH分泌显著上升(P0.05);与模型对照组比较,通脉方低剂量组、通脉方中剂量组FSH分泌显著下降(P0.05)。(5)血清LH检测表明:与空白对照组比较,模型对照组LH分泌显著增高(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组LH分泌显著降低(P0.05)。(6)血清T检测表明:与空白对照组比较,模型对照组T分泌显著下降(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组T分泌显著增高(P0.05)。(7)睾丸组织Hsp60检测表明:与空白对照组比较,模型对照组Hsp60表达显著降低(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组、迈之灵组Hsp60表达显著增高(P0.05),表明各剂量组通脉方与迈之灵均可上调Hsp60。(8)睾丸组织Hsp90检测显示:与空白对照组比较,模型对照组Hsp90表达显著下降(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组、迈之灵组Hsp90表达显著增强(P0.05),表明各剂量组通脉方与迈之灵均可上调Hsp90的表达。(9)睾丸组织Bax检测显示:与空白对照组比较,模型对照组Bax表达显著增高(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组与迈之灵组Bax表达显著降低(P0.05),表明各剂量组通脉方及迈之灵均可下调Bax的表达。(10)睾丸组织Bcl-2检测显示:与空白对照组比较,模型对照组Bcl-2表达显著降低(P0.05);与模型对照组比较,通脉方各剂量组与迈之灵组大鼠睾丸组织Bcl-2表达显著增高(P0.05),表明各剂量组通脉方及迈之灵均可显著上调Bcl-2表达。结论:通脉方修复VC大鼠生精功能的机制可能为抑制睾丸生精细胞凋亡,其抑制生精细胞凋亡的机制为上调Hsp60、上调Hsp90和下调Bax、上调Bcl-2的表达,调控生殖激素分泌,从而保护睾丸生精功能,改善精子质量。通脉方可显著改善精子质量,疗效显著优于迈之灵。
【图文】：
各组大鼠附辜精子浓度
图５．各组大鼠血清ＦＳＨ表达情况逡逑
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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