【摘要】：胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。晚期胃癌主要的治疗手段仍已化疗为主,然而在治疗过程中往往会产生耐药性。有报道指出,从中药丹参(Salvia miltiorrhiza)中分离得到的二萜类产物丹参酮(Tanshinones)显示出多种抗癌活性,尤为突出的是其在不同癌症中能够逆转癌细胞耐药性。因此,本研究旨在探究丹参植物中活性成分含量最高的丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TAN ⅡA)是否能够逆转胃癌细胞对广谱性抗癌药物多柔比星(Doxorubicin,DOX)的耐药性。目的:观察TAN ⅡA是否可以逆转对DOX耐药的胃癌细胞耐药性,并探究其潜在的分子机制。方法:基于DOX的IC_(50),鉴定了对DOX较为敏感的胃癌细胞SNU-719和SNU-610,以及对DOX相对耐药的胃癌细胞SNU-638,SNU-668,SNU-216和SNU-620(内源性耐药);通过选择性药物浓度逐步增加法,挑选两种DOX敏感性胃癌细胞SNU-719和SNU-610作为母本细胞,分别建立了对DOX耐药胃癌细胞SNU-719R和SNU-610R(获得性耐药);利用DOX和DOX+TAN ⅡA两种不同方式处理细胞,通过流式细胞术分析细胞周期分布、细胞凋亡情况以及药物外排情况;结合Real-time PCR检测相关药物外排转运蛋白的mRNA表达;利用Western blot法分析研究细胞中各种相关蛋白质的表达水平;通过ELISA来测定凋亡相关蛋白酶的活性等。结果:(1)TAN ⅡA与DOX联合用药后,TAN ⅡA能够逆转胃癌细胞对DOX产生的耐药性;(2)在由多药耐药相关蛋白1(Multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)过表达介导产生的DOX耐药中,使用TAN ⅡA与DOX联合用药可以引起MRP1的下调,从而逆转胃癌细胞对DOX的耐药;(3)TAN ⅡA的存在能够引起对DOX耐药的胃癌细胞中细胞周期G2/M期发生阻滞;(4)在使用TAN ⅡA与DOX共处理细胞后,我们通过实验检测到促凋亡蛋白p53和Bax的上调,抗凋亡蛋白Bcl-2的下调,佐以流式分析不同药物处理后细胞的凋亡情况,证明了TAN ⅡA能够引起胃癌耐药细胞中细胞凋亡水平的增加;(5)当DOX和TAN ⅡA共处理后引起了胃癌耐药细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ的显着上调以及p62的下调,因此表明TAN ⅡA能够激活自噬信号,诱导胃癌耐药细胞的自噬性细胞死亡,最终达到逆转耐药的目的。结论:TAN ⅡA可以逆转对DOX耐药的胃癌细胞耐药性,是一种能够参与胃癌联合用药治疗的潜在试剂。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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