附子理中汤对脾阳虚证模型大鼠AQP4及ANP表达及干预机制的研究

发布时间：2020-04-23 14:55

【摘要】：目的:观察附子理中汤对脾阳虚证大鼠水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)及心房利尿钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)水平的影响,探讨其参与脾阳虚证大鼠水液代谢调节的机制。方法:清洁级Wistar大鼠120只,雌雄不限,并随机分为空白对照组、假手术组、模型组和附子理中汤高、中、低剂量组共6个组,每组20只。取其中100只,采用肩胛间棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激的复合因素造模方法,建立脾阳虚证动物模型(假手术组只找到BAT但不切除)。造模成功后,予附子理中汤灌胃进行药物干预,高、中、低剂量各组灌胃剂量分别为40g·kg~(-1)·d、20g·kg~(-1)·d、10g·kg~(-1)·d,用药干预时间共30天,期间每天进行动物行为学观察。于给药30天后(其中模型组于造模成功后第1天)取材,用常规生化法检测血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿肌酐(urinary creatinine,UCr)含量,HE染色法观察大鼠胃窦与回肠组织病理形态学变化;ELISA法检测ANP含量;用荧光实时定量RT-PCR法检测大鼠回肠组织AQP4 mRNA表达情况;用Western blot法检测大鼠回肠组织AQP4含量。实验所获得的数据以均数±标准差(±S)表示,两组之间进行t检验,两两比较用q检验,按检验水准α=0.05,以P0.05为差异有统计学意义。结果:(1)一般情况观察:模型组大鼠出现畏冷喜扎堆、皮毛枯槁,伴食欲不振、倦怠、消瘦、便溏、肛周污秽等脾阳虚证的临床表现。与模型组相比,附子理中汤各剂量组进行药物干预后第2周开始,各组大鼠的精神状态、活动状况、食量与饮水量、大便情况均有不同程度的改善。(2)HE染色光镜下观察:附子理中汤各剂量组大鼠胃窦与回肠组织病理改变均有不同程度的减轻,以高剂量组效果最优。(3)RT-PCR:与模型组相比,中、高剂量组AQP4mRNA表达水平相对较高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。(4)Western blot:与模型组相比,中、高剂量组AQP4含量相对较高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。(5)ELISA:与模型组相比,中、高剂量组ANP含量相对较高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:(1)附子理中汤能改善脾阳虚证大鼠回肠AQP4、ANP含量及AQP4mRNA表达;可有效改善脾阳虚大鼠腹泻症状。(2)改善程度与给药剂量成正相关,高、中剂量优于低剂量;(3)AQP4、ANP均可能是附子理中汤参与调节脾阳虚证大鼠水液代谢的分子生物学物质基础之一。
【图文】：

各组SCr、BUN、UCr含量

未见明显改善；高剂量组较模型组明显改善，与正常组与假手术组基本接近，，组织结构完整，层次分明，界限明显清晰，局部固有层轻度水肿，间质较为疏松，回肠粘膜皱襞完整，未见异常病变，粘膜上皮细胞与腺体分布正常，无明显细胞变性，少量炎细胞浸润，可见淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞，以浆细胞为主。（见图 2-图 9）。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332

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