疏肝健脾法复方含药血清对HepG2.2.15细胞JAK2，STAT3mRNA及HBsAg表达的影响
发布时间：2020-04-23 18:26
【摘要】：研究目的:探讨疏肝健脾法治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎的优越性,并通过蛋白酪氨酸激酶(Janus Kinase,JAK)-信号转导子和转录激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号转导通路,进一步阐明其可能作用机制,为推广临床应用疏肝健脾法治疗慢性乙型肝炎提供理论依据与数据支持。研究方法:1、制备人体血清:选取40名健康志愿者以及80名符合纳入标准的肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者。将患者随机分成中药组和西药组,每组各40名,分别给予疏肝健脾法中药复方和恩替卡韦治疗,连续用药14天。静脉采血10ml,低温高速离心10min,制成人体含药血清及正常血清,-20℃冻存待用。2、细胞体外培养:HepG2.2.15细胞株用完全培养基,置于37℃,5%CO2细胞孵育箱内常规培养。分组后给予相应实验血清培养。3、采用噻唑蓝(methyl thiazolylium,MTT)比色法检测各组血清干预HepG2.2.15细胞48h、96h、144h后的生长情况。4、采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组血清干预HepG2.2.15细胞48h、96h、144h后HBsAg分泌情况。5、采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测各组血清干预 HepG2.2.15 细胞 48h、96h、144h 后 JAK2 mRNA、STAT3 mRNA 的相对表达水平。结果:1、用MTT法检测各组血清干预HepG2.2.15细胞不同时间后细胞生长情况,结果显示:与细胞对照组相比,各实验血清组均能促进细胞生长增殖(P0.01),西药血清组与10%、20%中药血清组两两相比,差异均有统计学意义(P0.05)。2、用ELISA法检测各组血清干预HepG2.2.15细胞不同时间后细胞分泌HBsAg情况,结果显示:在48h、96h、144h时,西药血清组与中药血清组差异有统计学意义(P0.01);但144h时,10%中药血清组与20%中药血清组相比,差异无统计学意义(P0.05)。3、用qPCR法检测各组血清干预HepG2.2.15细胞不同时间后JAK2mRNA的相对表达水平,结果显示:与细胞对照组相比,健康血清组上调JAK2mRNA表达水平(P0.05),其余各组含药血清随着干预时间延长,均抑制JAK2mRNA相对表达,20%中药血清组更能明显下调JAK2mRNA表达水平(P0.01)。4、用qPCR法检测各组血清干预HepG2.2.15细胞不同时间后STAT3 mRNA的相对表达水平,结果显示:与细胞对照组相比较,健康血清组调控STAT3 mRNA表达作用无明显差异(P0.05),而西药血清组、10%中药血清及20%中药血清组均不同程度下调STAT3mRNA表达(P0.05),尤其20%中药血清组下调STAT3mRNA作用最明显(P0.01)。结论:1、疏肝健脾法含药血清能够相对抑制HepG2.2.15细胞增殖,并与时间正相关。2、疏肝健脾法含药血清能持续、稳定抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg,具有一定抗HBV作用,其效果较西药恩替卡韦明显。3、疏肝健脾法含药血清明显降低HepG2.2.15细胞内JAK2,STAT3mRNA相对表达水平。4、疏肝健脾法含药血清抗HBV作用机制可能与下调细胞内JAK2,STAT3mRNA的表达,阻断JAK2-STAT3信号转导通路有关。
【图文】：
图２－１邋ＨｅｐＧ２．２．１５细胞生长曲线逡逑４．２邋ＥＬＩＳＡ法检测ＨｅｐＧ２．２．１５细胞分化ＨＢｓＡｇ的情况逡逑结果显示（见表２－３、图２－２）：在４}、９化时，四组人体化清分别与细胞对照组两逡逑两分析对比，均有统计学差异（尸＜０．０５）；西药血清组与１０％、２０％中药血清组相比有逡逑显著差异（尸＜０．０１），同时，西药血清组抑制率明显高于健康血清组（尸＜０．０５）邋；邋２０％逡逑中药血清组对ＨＢｓＡｇ的抑制率高于１０％中药血清组，二者对比具有显著统计学差异（尸逡逑＜０．０１）。１４他时，西药血清组分别与其他血清组比较，差异有统计学意义（；＾＜０．０５）；逡逑但１０％中药血清组与２０％中药血清组相比，，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在不同时逡逑间节点，各组实验血清均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ，差异具有统计学意义（尸逡逑＜０．０５）。由此表明，疏肝健脾法含药血清与恩替卡韦均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５细胞表达逡逑ＨＢｓＡｇ
据ＪＡＫ２、ＳＴＡＴ３及Ｐ－ａｃｔｉｎ样品基因扩X椙吆痛馇呖芍纠┰銮吣夂襄义狭己茫咏馇叱鱿值ヒ徊ǚ澹嶂到咏尥庠葱晕廴炯按嬖谝锒厶澹┰鼍哂绣义厦飨蕴匾煨裕瘢校妹穹从μ逑滴榷ǎ０宸峙渚龋峁煽浚
本文编号：2638017
【图文】：
图２－１邋ＨｅｐＧ２．２．１５细胞生长曲线逡逑４．２邋ＥＬＩＳＡ法检测ＨｅｐＧ２．２．１５细胞分化ＨＢｓＡｇ的情况逡逑结果显示（见表２－３、图２－２）：在４}、９化时，四组人体化清分别与细胞对照组两逡逑两分析对比，均有统计学差异（尸＜０．０５）；西药血清组与１０％、２０％中药血清组相比有逡逑显著差异（尸＜０．０１），同时，西药血清组抑制率明显高于健康血清组（尸＜０．０５）邋；邋２０％逡逑中药血清组对ＨＢｓＡｇ的抑制率高于１０％中药血清组，二者对比具有显著统计学差异（尸逡逑＜０．０１）。１４他时，西药血清组分别与其他血清组比较，差异有统计学意义（；＾＜０．０５）；逡逑但１０％中药血清组与２０％中药血清组相比，，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。在不同时逡逑间节点，各组实验血清均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ，差异具有统计学意义（尸逡逑＜０．０５）。由此表明，疏肝健脾法含药血清与恩替卡韦均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５细胞表达逡逑ＨＢｓＡｇ
据ＪＡＫ２、ＳＴＡＴ３及Ｐ－ａｃｔｉｎ样品基因扩X椙吆痛馇呖芍纠┰銮吣夂襄义狭己茫咏馇叱鱿值ヒ徊ǚ澹嶂到咏尥庠葱晕廴炯按嬖谝锒厶澹┰鼍哂绣义厦飨蕴匾煨裕瘢校妹穹从μ逑滴榷ǎ０宸峙渚龋峁煽浚
本文编号：2638017
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2638017.html
