石蒜碱诱导结肠癌细胞株HT29凋亡及其机制的研究

发布时间：2020-04-24 08:03

【摘要】：背景:癌症是世界范围内的重大公共卫生问题之一,结直肠癌(Colorectal Cancer)是世界上最常见的恶性肿瘤之一。2019年美国结直肠癌预计的发病率和死亡率将在所有癌症中居于第三位,结直肠癌严重威胁着人类的健康。药物化疗是治疗结直肠癌的主要方法之一,但因传统化疗药物选择性差,伴有不同程度毒副作用,长期使用导致耐药等原因,直接或间接影响患者的预后情况和生存质量。由于不少患者对天然化合物具有很好的耐受性,即使在高剂量时也不会产生明显的毒副作用。因此,急切寻找一种更有效的天然化合物,与传统化疗药物相结合,从而提高结直肠癌患者的预后和生存质量。目的:(1)探究石蒜碱能否抑制结肠癌HT29细胞株增殖,并诱导其凋亡。(2)探究石蒜碱诱导结肠癌HT29细胞株凋亡的可能机制。方法:(1)石蒜碱对结肠癌HT29细胞增殖和凋亡的影响,(1)MTT法检测石蒜碱对HT29细胞增殖的影响。(2)细胞克隆实验检测石蒜碱对HT29细胞集落形成的影响。(3)Hochest33258实验观察石蒜碱对HT29细胞核凋亡形态的影响。(4)流式细胞术检测石蒜碱对HT29细胞凋亡情况的影响。(2)石蒜碱诱导结肠癌HT29细胞凋亡的可能机制,Western blot检测石蒜碱对HT29细胞中的Bcl-2、Bax、caspase-3、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、AKT、NF-κB蛋白表达的影响。结果:(1)石蒜碱对结肠癌HT29细胞增殖和凋亡的影响,(1)MTT法结果显示石蒜碱能有效抑制结肠癌HT29细胞增殖(P0.05),呈现时间、浓度依赖性。(2)细胞克隆实验结果显示石蒜碱能显著抑制HT29细胞集落形成能力(P0.05),呈浓度依赖性。(3)Hochest33258实验结果显示石蒜碱能促进HT29细胞产生凋亡,细胞形态呈现明显的凋亡变化。(4)流式细胞术检测结果显示石蒜碱能有效促进HT29细胞凋亡,呈现浓度依赖性(P0.05)。(2)Western blot检测结果显示石蒜碱能明显下调HT29细胞中的Bcl-2、p-ERK、AKT、NF-κB的表达,上调Bax、caspase-3、p38、JNK的表达。结论:(1)石蒜碱能明显抑制结肠癌HT29细胞株增殖,并诱导其凋亡。(2)石蒜碱诱导结肠癌HT29细胞,发生凋亡的机制可能与上调促凋亡蛋白Bax,caspase-3蛋白,下调抑凋亡蛋白Bcl2蛋白,发生内源性凋亡途径有关。(3)石蒜碱诱导结肠癌HT29细胞株凋亡的可能机制是与抑制MAPK/ERK通路,激活MAPK/p38、MAPK/JNK通路有关。(4)石蒜碱诱导结肠癌HT29细胞株凋亡的可能机制是与抑制AKT/NF-κB通路来实现。
【图文】：

石蒜碱诱导结肠癌细胞株 HT29 凋亡及其机制的研究 2019 届硕士学位毕业论文结果1. MTT 实验观察石蒜碱对结肠癌 HT29 细胞增殖的影响MTT 实验结果如图 1 所示，与空白对照组比较，石蒜碱诱导作用于 HT29 细胞 24、48h 后，HT29 细胞的存活率明显下降（P<0.05），且呈时间、浓度依赖相关。石蒜碱对 HT29 细胞增殖有明显的抑制作用，，石蒜碱作用于 HT29 细胞后的 24、48h 的 IC50 分别为（23.52±1.33）、（0.59±0.20）umol·L-1。

石蒜碱诱导结肠癌细胞株 HT29 凋亡及其机制的研究 2019 届硕士学位毕业论文2. 细胞克隆形成实验观察石蒜碱对结肠癌 HT29 细胞增殖的影响细胞克隆形成实验结果如图 2 显示，（0、1、4、16 umol·L-1）各石蒜碱加药组加药诱导HT29细胞接种7d后形成肉眼可见的细胞集落 ， 克 隆 形 成 率 分 别 为 (77.00±3.61)% 、 (64.17±2.02) % 、(51.50±2.78) %、(26.67±1.61) %,克隆形成率明显下降（P<0.05），且呈明显量效趋势，说明石蒜碱能有效抑制结肠癌 HT29 细胞的集落形成能力，抑制癌细胞增殖。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2638722