基于CAF诱导EMT探讨阳和汤干预乳腺癌肺转移研究

发布时间：2020-04-26 21:57

【摘要】：【目的】本研究以在乳腺癌转移过程中发挥重要作用的CAF诱导EMT为切入点,选择乳腺癌肺转移裸鼠模型为研究对象,在验证阳和汤抗乳腺癌肺转移效应的基础上,观察其不同给药剂量对CAF、TGF-?1、EMT等的关键标志物的影响,从调控肿瘤微环境的角度深入探讨阳和汤干预乳腺癌肺转移的作用机制。【方法】1.乳腺癌肺转移裸鼠模型的建立:于裸鼠右侧胸壁第二对乳腺脂肪垫接种0.2ml人乳腺癌MDA-MB-231细胞悬液(浓度为5×10~7/ml)。观察肿瘤细胞增殖情况,当增殖为肉眼可见时即造模成功。通过病理切片观察组织形态评价模型的有效性。2.阳和汤干预裸鼠成瘤及肺转移研究:将造模成功的30只裸鼠随机分为5组,分别为模型组、阳性组、阳和汤高剂量组、阳和汤中剂量组和阳和汤低剂量组,每组6只,另选6只健康裸鼠作为空白组。连续给药21天后取瘤、取肺。石蜡组织切片观察裸鼠肺部转移灶情况。绘制裸鼠体重变化曲线、原位瘤生长曲线,计算原位瘤抑瘤率。3.阳和汤干预乳腺癌肺转移与调节CAF、TGF-?1、EMT的关系:取裸鼠肺组织,制作石蜡切片,免疫组化法检测肺组织中CAF标志物?-SMA的表达;Real-time PCR法检测肺组织中TGF-?1基因的表达;Western Blot法检测肺组织中EMT标志物E-cadherin、Vimentin的表达。【结果】1.造模成功,成瘤率100%。乳腺癌原位瘤均位于裸鼠右侧第二乳头下方,边界清楚,形状规则,触诊活动度尚可,包膜完整,部分出现粘连。取材时观察到,原位瘤成鱼肉色,质韧,切开后中心存在灰色坏死组织。原位瘤组织与肺组织HE染色均可查见肿瘤。2.乳腺癌原位瘤组织HE染色均可查见肿瘤;肺组织HE染色除空白组、阳性组外,均可查见肿瘤。绘制原位瘤生长曲线,各组原位瘤抑瘤率分别为阳性组(51.44%)、阳和汤高剂量组(18.16%)、阳和汤中剂量组(26.37%)、阳和汤低剂量组(9.22%)。3.药物干预后,各组裸鼠肺组织中空白组?-SMA表达量均高于其余各组(P0.01);与模型组相比,阳性组?-SMA明显减少(P0.01),阳和汤中剂量组?-SMA减少(P0.05)。空白组TGF-β1mRNA表达量均低于其余各组(P0.01);与模型组相比,阳性组TGF-β1m RNA明显减少(P0.01),阳和汤中剂量组TGF-β1mRNA减少(P0.05)。表明阳和汤可以降低裸鼠肺组织CAF、TGF-β1基因的表达。空白组E-cadherin的表达量均高于其余各组(P0.01);与模型组相比,阳性组、阳和汤中剂量组、阳和汤低剂量组E-cadherin明显减少(P0.01)。空白组Vimentin表达量均低于其余各组(P0.01);与模型组相比,阳性组Vimentin明显减少(P0.01),阳和汤中剂量组Vimentin减少(P0.05)。表明阳和汤可以上调裸鼠肺组织E-cadherin的表达,下调Vimentin的表达,进而抑制EMT过程。【结论】阳和汤抑制乳腺癌肺转移瘤浸润,是通过降低裸鼠肺组织TGF-β1m RNA、α-SMA(CAF)表达,上调E-cadherin,下调Vimentin,进而抑制EMT过程,抑制乳腺癌肺转移。
【图文】：

原位,裸鼠,HE染色

易激惹，常有打斗现象，乳头较其他组隆起增大。瘤情况观察鼠接种后第 7 天，造模成功，模型组原位瘤成瘤率 100%。原位瘤均位侧第二乳头下方，肉眼可见一小结节，质硬，瘤体边界清楚，形状规则动度较差，，包膜完整，部分出现粘连。取材时观察到，原位瘤成鱼肉色切开后中心可存在灰色坏死组织。织学观察原位瘤组织学观察取的模型组原位瘤瘤体呈结节状，类圆形或椭圆形，与周围组织境界清，肿瘤质地较软，内可见较大范围灶性坏死、出血和实性结构。镜下观腺导管结构消失，癌细胞单个杂乱排列，细胞大小形态较一致，核大，型，胞浆丰富，细胞呈浸润性生长。

肺组织,裸鼠,HE染色,原位

图 2 造模后 21 天裸鼠肺组织 HE 染色（×400） A 空白组：正常肺组织，仅伴少量充血；图 B 模型组：肺组织可查见肿瘤转移灶血、坏死、含铁血黄素沉着）小结成瘤情况观察：造模成瘤率 100%。乳腺癌原位瘤均位于裸鼠右侧第二，边界清楚，形状规则，触诊活动度较差，包膜完整，部分出现粘连。察到，原位瘤成鱼肉色，质韧，切开后中心可存在灰色坏死组织。原位HE 染色可见乳腺导管结构消失，癌细胞单个杂乱排列，细胞大小形态较一，可见核异型，胞浆丰富，肿瘤中心缺血缺氧坏死。肺组织 HE 染色均瘤转移灶，与空白组肺组织相比，转移瘤细胞排列紧密、核大深染、核核仁明显。模型组中 4 号裸鼠肉眼可见原位瘤，但 HE 染色显示：乳腺导管结构正
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】