合欢皮提取物对高糖环境下HRCECs增殖及VEGF表达的影响

发布时间：2020-04-30 01:45

【摘要】：目的:探索在高糖环境下合欢皮提取物(Acacia julibrissin extract,AJE)是否对体外培养的人视网膜血管内皮细胞(Human retinal vascular endothelial cells,HRCECs)的增殖及其VEGF表达有影响,以此为依据进一步明确合欢皮提取物是否可用于治疗糖尿病视网膜相关病变。方法:于体外建立高糖环境来培养人视网膜血管内皮细胞,并用细胞免疫荧光法予以鉴定;通过预实验确定合欢皮提取物实验浓度后,利用MTT比色分析法研究不同浓度合欢皮提取物对HRCECs增殖的作用;利用蛋白质免疫印迹法明确不同浓度合欢皮提取物对HRCECs中VEGF表达的影响。结果:人视网膜血管内皮细胞在高糖环境的培养下由于不同浓度合欢皮提取物的干预,其细胞增殖水平会受到不同程度地抑制。具体表现有:1、根据MTT比色法数据结果分析得出:1)在同一培养时间下,低糖组HRCECs数量相对于高糖组是明显减少的,P0.05,在统计学上具有差异;2)HRCECs经过24h、48h培养后,不同浓度合欢皮提取物(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)+高糖组不同组别之间两两比较,HRCECs细胞抑制率随着合欢皮提取物浓度升高而增加,结果具有显著性差异(P0.05);但HRCECs经过72h培养后,不同浓度合欢皮提取物(10μg/ml、20μg/ml)+高糖组两组之间的吸光度值在统计学上无明显差异,浓度为(30μg/ml、40μg/ml)合欢皮提取物+高糖组两组间吸光度值亦无明显差异,(P0.05),无统计学意义,因此在接下来的实验中选取24h及48h培养时间段进行研究;2、应用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测本实验不同分组HRCECs中VEGF的表达情况:1)HRCECs无论是经过24h还是48h培养后,高糖组HRCECs中VEGF的表达量都高于低糖组,其蛋白条带灰度值数据分析结果具有显著差异,有统计学意义(P0.05);2)HRCECs在同一培养时间下,不同浓度合欢皮提取物(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)+高糖组不同浓度分组间两两比较,HRCECs中VEGF的表达量随着合欢皮提取物浓度升高而降低,结果具有显著性差异(P0.05)。结论:高糖环境能够促使体外培养的HRCECs增殖及其VEGF表达增加;高糖环境下培养的HRCECs增殖受不同浓度AJE的抑制,在一定时间范围内,其规律呈浓度依赖性;同时不同浓度的AJE干预下可下调HRCECs中VEGF的表达。
【图文】：

第四章 实验结果培养与传代：7℃ 的培养箱内培养原代 HRCECs，，培养一至两显微镜下可见其为扁平梭状，其中混有多种杂液，待细胞培养一至两周时，杂质细胞已明养皿底部，并出现细胞接触抑制现象（见图比例规律开始传代，约 1~2 天予以换液，取对

4.1 HRCECs培养至14天时，细胞呈铺路石样×200的鉴定：标记的第 VIII 因子相关抗原抗体孵育后，人视网膜黄绿色荧光，黑绿色的为胞核，细胞轮廓清楚（见育 HRCECs 成功。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2645245