强骨宝对疲劳性大鼠膝骨关节炎关节软骨的作用机制

发布时间：2020-04-30 14:29

【摘要】：目的观察强骨宝对疲劳性大鼠膝骨关节炎软骨的形态学改变及检测关节软骨中MMP-3和ADAMTS-7表达的影响,以探讨该方的作用机制。方法1.疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型的建立与鉴定6月龄雌性SD大鼠24只,随机分为空白组,去卵巢组和跑步组,每组8只。去卵巢组和跑步组在无菌条件下摘除双侧卵巢,空白组不做任何处理。空白对照组和去卵巢组正常活动,跑步组大鼠进行上坡跑台运动,以建立劳损模型。跑台运动方案设定为30m/min、30min/次,60min/d、坡度为16°,每周休息1天,连续训练6周。然后取大鼠股骨,观察关节软骨大体形态,光镜下观察形态学改变,取腹主动脉血,检测血清中TNF-α、IL-1β、COMP含量,以鉴定疲劳性KOA模型。2.强骨宝的作用机制研究6月龄雌性SD大鼠32只,随机分为空白组、生理盐水组、筋骨痛消丸组、强骨宝组,每组8只,除空白组外,其余三组按上述跑步组方法建立模型大鼠。空白组常规饲养,另3组分别给予0.9%生理盐水、筋骨痛消丸、强骨宝灌胃治疗,每日两次,治疗周期为1个月。然后取腹主动脉血、关节、关节软骨。ELISA法检测血清中IL-1β、TNF-α、COMP含量,膝关节固定脱钙后行HE染色,光镜下观察形态学改变,Western blot法及qPCR法检测软骨中MMP-3、ADAMTs-7的表达情况。结果1.模型鉴定结果:造模6周后,软骨Mankin评分结果显示:与空白对照组相比,去卵巢组和跑步组均升高(P0.01);与去卵巢组相比,跑步组较高(P0.01)。IL-1β、TNF-α及COMP含量比较:与空白对照组比较,其余2组均明显升高(P0.01);与去卵巢组比较,跑步组更高(P0.01)。因此,无论是从血清学检测还是对形态学镜下观察均说明本次模型成功。2.强骨宝作用机制探讨结果:(1)软骨Mankin评分结果,与空白组相比,其余3组较高(P0.01);与生理盐水组相比,筋骨痛消丸组及强骨宝组均降低(P0.01)。(2)血清中IL-1β、TNF-α及COMP含量比较显示,与生理盐水组相比,筋骨痛消丸组及强骨宝组均降低(P0.01)。(3)Western blot结果显示:各组软骨中MMP-3、ADAMTs-7蛋白均有表达,与生理盐水组相比,筋骨痛消丸组及强骨宝组明显降低(P0.05);强骨宝组与筋骨痛消丸组比较无差异(P0.05)。(4)qPCR结果显示:生理盐水组、筋骨痛消丸组及强骨宝组的MMP-3 mRNA、ADAMTs-7 mRNA表达均高于空白组(P0.01);与生理盐水组相比,筋骨痛消丸组及强骨宝组均降低,有显著差异(P0.01);强骨宝组与筋骨痛消丸组无差异(P0.05)。结论强骨宝汤通过抑制MMP-3、ADAMTs-7的表达,减少COMP的降解,稳定软骨细胞外基质内环境,从而有利于膝骨关节炎的修复。
【图文】：

图 1 各组大鼠关节软骨大体形态观察3.1.3 光镜下观察关节软骨组织形态学比较 空白对照组软骨表层规则，细胞数量及形态正常，基质着色均匀，潮线清晰，软骨面无破坏；与空白组相比，去卵巢组软骨表层及中深层细胞轻微减少，潮线不及空白组清晰，基质着色变浅。而去势加跑步组鼠软骨表面毛糙，，不光滑，基质着色不均，表层、移行层、辐射层、钙化层分层不明显，弥漫性细胞过多且排序规则，潮线紊乱。（见图 2）

强骨宝对疲劳性大鼠膝骨关节炎关节软骨的作用机制软骨表层规则，细胞数量及形态正常，无簇集现象，基质着色均匀软骨表面无明显裂隙，软骨表层及中深层细胞轻微减少，基质着色变毛糙，不光滑，中深层弥漫性细胞过多且排序不规则，潮线紊乱，鼠关节软骨 Mankin 评分 Mankin 评分结果显示：与空白组有显著差异（P<0.01）；与去卵巢组组比较，跑步组差异明。（见图 3）
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2645863