活血定眩胶囊含药血清对ODG环境下bEnd.3细胞自噬及相关蛋白表达的影响

发布时间：2020-05-01 13:02

【摘要】：目的:本研究以bEnd.3细胞建立氧糖剥夺模型模拟椎-基底动脉缺血乏氧状态,初步探讨血定眩胶囊含药血清对缺血乏氧环境对bEnd.3细胞自噬和相关蛋白表达的影响,为活血定眩胶囊的临床应用及进一步推广提供科学依据,最终在细胞及蛋白水平上为中医药防治椎动脉型颈椎病提供研究思路。方法:制备活血定眩胶囊含药血清;培养bEnd.3细胞并传代,将传至3代的bEnd.3细胞建立OGD模型,并设置分组:空白组,OGD模型组,活血定眩胶囊含药血清高、中、低剂量组(15%、10%、5%),西药组,按照相应条件进行给药并干预6h。在显微镜下观察正常细胞形态;采用单丹磺酰尸胺染色观察bEnd.3细胞自噬小体;硝酸根还原酶法检测一氧化氮含量;微量酶标法检测乳酸脱氢酶释放量;采用Western blot技术检测bEnd.3细胞p62、Bcline-1、LC3蛋白的表达水平;观察活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞自噬及相关蛋白表达的影响。结果:1对P1代bEnd.3细胞进行复苏,于第二天时可见其贴壁生长,呈长条形或梭形或多边形,胞浆丰富,形态饱满。在适宜的条件下第三天时细胞增殖分裂加快,长满瓶底,呈铺路石样。2单丹磺酰尸胺染色在荧光显微镜下观察自噬小体,表现为大小不一、形状不等、致密浓染的荧光颗粒。3活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞中NO含量的影响:与空白组相比,OGD模型组由于乏氧饥饿,细胞活性减低,细胞受损,NO分泌减少,两组间差异具有统计学意义(P0.01);与模型组相比,活血定眩胶囊含药血清组及西药组NO的含量较高,且具有统计学意义(P0.05);活血定眩胶囊含药血清中剂量组与西药组之间无明显差异,两组疗效相当,且含药血清中剂量组高于活血定眩胶囊含药血清高剂量、低剂量组;4活血定眩胶囊含药血清对bEnd.3细胞中LDH释放量的影响:与空白组相比,模型组LDH释放量明显增多,且差异具有统计学意义(P0.01);与模型组相比,活血定眩胶囊含药血清高、中、低剂量组与西药组LDH释放量较低,且与模型组相比,活血定眩胶囊含药血清组高、低剂量组与西药组具有统计学意义(P0.05);5活血定眩胶囊含药血清对自噬相关蛋白Bcline-1、LC3、p62的影响:与空白组比较,OGD模型组p62、Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平均升高,Becline-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达具有统计学意义(P0.01),p62蛋白表达无统计意义(P0.05);与模型组相比,活血定眩含药血清中剂量组和西药组p62表达明显下降,Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达明显升高,具有统计学意义(P0.01),p62蛋白表达中活血定眩胶囊含药血清中剂量组与西药组见无统计学意义(P0.05),且p62与Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ两组之间表达呈负相关。结论:1活血定眩胶囊可明显改善乏氧饥饿条件对bEnd.3细胞造成的损伤,增加NO的分泌量并且抑制LDH的释放量,改善血管内皮细胞活性;2活血定眩胶囊含药血清通过影响p62、Bcline-1、LC3相关自噬蛋白的表达水平从而调控乏氧饥饿环境下bEnd.3细胞自噬,进一步改善血流,调节血管内皮功能,促进血管新生,为活血定眩胶囊防治CSA提供新思路。
【图文】：

活血定眩胶囊含药血清对 OGD 环境下 bEnd.3 细胞自噬及相关蛋白表达的影响4 统计学方法采用 SPSS22.0 软件进行数据处理，其中正态分布或接近正态分布的均以均数±标准差（ X±S）表示。组间比较用 t 检验，多组之间比较采用单因素方差分析，P＜0.05即有统计学意义。三 实验结果1 bEnd.3 细胞形态学结果对 P1 代 bEnd.3 细胞进行复苏，于第二天时可见其贴壁生长，，呈长条形或梭形或多边形，胞浆丰富，形态饱满。在适宜的条件下第三天时细胞增殖分裂加快，长满瓶底，呈铺路石样。如图 1 所示：

MDC染色
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2646675