【摘要】：目的:本课题采用响应曲面法优化瘤果黑种草子总黄酮的提取工艺,检测瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤细胞增殖能力和体外抗肿瘤细胞迁移能力,进行自噬相关基因的检测,探讨瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤活性的作用机制。方法:选取甲醇体积分数、提取时间、提取温度等3个因素为考察指标,采用响应面法分析优化瘤果黑种草子总黄酮的提取工艺。经瘤果黑种草子药物干预人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7和人脑胶质瘤细胞株U251,采用MTT法检测瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤细胞增殖能力;用倒置显微镜观察对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7和人脑胶质瘤细胞株U251细胞形态的影响。通过划痕实验检测对肿瘤细胞迁移能力的影响,并进一步使用荧光定量PCR方法检测自噬相关基因。结果:1.响应面法优化瘤果黑种草子总黄酮提取工艺:甲醇体积分数61%、提取时间1.5 h、提取温度74℃、料液比1:25 g/mL,在此条件下瘤果黑种草子总黄酮得率的平均值2.2314 mg/g。2.瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤细胞增殖能力的检测:瘤果黑种草子总黄酮对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人脑胶质瘤细胞株U251的增殖均有抑制作用。瘤果黑种草子总黄酮对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2在药物浓度为15μg/mL时开始起效(P0.05),之后随着药物浓度的升高瘤果黑种草子总黄酮对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2的抑制率也不断升高,呈现良好的量效依赖关系;瘤果黑种草子总黄酮对人人乳腺癌细胞株MCF-7、人脑胶质瘤细胞株U251在药物浓度为10μg/mL时开始起效(P0.05),之后随着药物浓度的升高瘤果黑种草子总黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7、人脑胶质瘤细胞株U251的抑制率也不断升高,呈现良好的量效依赖关系。3.瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤细胞迁移能力的检测:药物干预24 h时后,人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人脑胶质瘤细胞株U251空白对照组划痕处细胞趋于汇合,各药物干预组划痕处变化不大。各药物干预组肿瘤细胞迁移距离比各空白对照组小,且差异有统计学意义(P0.05)。4.自噬相关基因的荧光定量PCR检测结果显示:与空白对照组相比,人结肠癌细胞株SW480、人乳腺癌细胞株MCF-7各药物干预组自噬相关基因BECN1的相对表达量均有不同程度的上升;人结肠癌细胞株Caco-2、人脑胶质瘤细胞株U251各药物干预组自噬相关基因BECN1的相对表达量均有不同程度的下降;且差异均具有统计学意义(P0.05)。与空白对照组相比,人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7各药物干预组自噬相关基因MAPILC3B相对表达量较空白对照组均有所上升;人脑胶质瘤细胞株U251各药物干预组自噬相关基因MAPILC3B相对表达量较空白对照组均有不同程度的下降;且差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:综上,响应面法优化了瘤果黑种草子总黄酮提取工艺。瘤果黑种草子总黄酮在体外对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7和人脑胶质瘤细胞株U251的增殖具有抑制作用。瘤果黑种草子总黄酮在体外对人结肠癌细胞株SW480、人结肠癌细胞株Caco-2、人乳腺癌细胞株MCF-7和人脑胶质瘤细胞株U251的迁移有抑制作用。实时荧光定量PCR结果初步揭示了诱导肿瘤细胞发生自噬性死亡可能是瘤果黑种草子总黄酮体外抗肿瘤作用的机制之一。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 刘燕;史玉柱;杨巧丽;王雪;王林林;姚华;黄华;徐芳;;瘤果黑种草子总皂苷的长期毒性研究[J];中药药理与临床;2013年06期
2 潘兰;贾晓光;李晓瑾;朱军;;维药瘤果黑种草子的化学成分初步分析(Ⅰ)[J];新疆农业科学;2009年04期
3 李静;刘玉明;刘庆华;李微;;瘤果黑种草子中磷脂类成分的研究[J];中成药;2015年01期
4 刘玉明,杨峻山,刘庆华;瘤果黑种草子化学成分的研究[J];中国中药杂志;2005年13期
5 张宏涛;张淑锋;陈雪莲;耿东升;;瘤果黑种草子总黄酮抗炎及平喘作用[J];中国实验方剂学杂志;2014年01期
6 耿东升;张文斌;马光霞;陈雪莲;;维药瘤果黑种草子生物碱对豚鼠离体平滑肌作用的实验研究[J];新疆中医药;2013年06期
7 耿东升;陈雪莲;;瘤果黑种草子挥发油对慢性阻塞性肺病大鼠肺部炎症的影响[J];中药药理与临床;2013年05期
8 赵军;徐芳;刘亚婷;李晨阳;谭为;陈燕;;维药瘤果黑种草子化学成分研究[J];中药材;2012年12期
9 耿东升;陈雪莲;陈明;;瘤果黑种草子挥发油平喘作用的研究[J];西北药学杂志;2014年01期
10 陈雪莲;耿东升;;瘤果黑种草子总黄酮对慢性阻塞性肺病大鼠模型炎症的干预作用及机制研究[J];中国药学杂志;2014年04期
相关会议论文 前2条
1 肖琼;李晓瑾;朱军;王月娥;;瘤果黑种草子颗粒的初步药效学研究与急性毒性实验研究[A];第六届肉苁蓉暨沙生药用植物学术研讨会论文集[C];2011年
2 耿东升;张淑锋;;维药瘤果黑种草子镇咳、祛痰、抗炎有效部位初步研究[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年
相关博士学位论文 前1条
1 刘玉明;瘤果黑种草子和红花化学成分及生物活性的研究[D];中国协和医科大学;2004年
相关硕士学位论文 前5条
1 热娜古丽·热依木;瘤果黑种草子总黄酮提取工艺优化及抗肿瘤作用研究[D];新疆医科大学;2019年
2 史荣梅;瘤果黑种草子皂苷的提取纯化及部分呼吸药效研究[D];新疆医科大学;2012年
3 张淑锋;维药瘤果黑种草子镇咳、祛痰、抗炎有效部位初步研究[D];新疆医科大学;2010年
4 刘亚婷;维药瘤果黑种草子指纹图谱及化学成分研究[D];新疆医科大学;2010年
5 倪君君;瘤果黑种草子化学成分的研究[D];沈阳药科大学;2007年
，
本文编号：
2646846
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2646846.html
