羊肚菌多糖（ME-X）结构鉴定、生物活性及抗肿瘤机制的研究

发布时间：2020-05-04 18:20

【摘要】：羊肚菌(Morehella esculenta(L.)Pers)隶属羊肚菌科(Morchellaceae)羊肚菌属(Morchella),其子实体形状酷似羊肚,因此得名羊肚菌。野生羊肚菌味道鲜美,营养丰富,是很好的食用和药用真菌。目前对羊肚菌的研究集中在人工栽培方面,在羊肚菌的结构研究中,能够将多糖结构清晰解析出来的几乎没有,且涉及羊肚菌多糖抗S180实体瘤机制方面的研究未见报道。本课题采用热水浸提法提取羊肚菌粗多糖,DEAE-52纤维素层析法和透析法等对其分离纯化。结合HPGPC、HPLC、FT-IR、GC-MS和NMR分析法等,对羊肚菌多糖(ME-X)的一级结构进行了分析,为其二三级结构解析提供依据。运用CCK-8法和中性红法分别检测ME-X对增殖免疫细胞及巨噬细胞吞噬功能的影响共同评价ME-X的免疫调节活性;运用CCK-8法检测ME-X对肿瘤细胞的结果评价ME-X的体外抗肿瘤活性;建立S180肿瘤小鼠模型评价ME-X的体内抗肿瘤活性,并运用Illumina HiScq TM 200测序法对小鼠肿瘤进行转录组测序,初步探究ME-X的抗肿瘤机制,并运用ELISA法对其进行验证。主要结果如下:(1)以四川省小金县野生羊肚菌子实体作为实验材料,采用热水浸提法,从200 g四川省小金县野生羊肚菌子实体中分离得到40 g粗多糖,得糖率20%。(2)结果表明ME-X由甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,且比例为4:4:1,即以(2,4→6)-α-D-吡喃甘露糖为主链骨架,6-O上出支链,环状支链由3个(1→6)-α-D-葡萄糖和1个(1,2→6)-α-D-半乳糖构成,→2)-α-D-葡萄糖作为末端糖与(1,2→6)-α-D-半乳糖1-O相连。(3)ME-X的免疫调节活性表明:与空白对照组相比,ME-X在一定浓度范围内具有良好的促进免疫细胞增殖的作用。当ME-X多糖浓度为10μg/mL时,T、B淋巴细胞增殖活性最好,增殖率分别为31.8%、63.02%;当ME-X多糖浓度为20μg/mL时,促进RAW264.7细胞的增殖能力及巨噬细胞吞噬活性均最好,增殖率为63.09%,吞噬率为22.49%。(4)ME-X的抗肿瘤活性表明:与空白对照组相比,ME-X在一定浓度范围内具有很好的抑制肿瘤细胞增殖的活性。当ME-X多糖浓度为20μg/mL时,抑制肿瘤细胞增殖效果最好,抑制率分别40.31%(MFC)、33.81%(CT26.WT)和21.19%(S180)。(5)结果发现ME-X能在体内抑制S180肿瘤的生长,抑癌率可达50.32%,并且是通过PI3K/AKT信号通路和Ras信号通路,共同抑制肿瘤细胞增长。通过这些研究不仅可以为ME-X免疫调节机制提供科学依据,同时还可以为ME-X的防癌、抗癌方面研究提供一定的理论支撑。
【图文】：

图 2-1 ME-X 的洗脱曲线Fig 2-1 Chromatogram of ME-X2.3.3 ME-X 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）ME-X 的 HPGPC 结果如下：由图 2-2 可知，ME-X 的 HPGPC 洗脱曲线有一个明显的吸收峰，峰型较高且成对称结构，后续研究均基于此峰对应区域的多糖。由图 2-3 可知，ME-X 的 Z+1 均分子量（Mz+1）为 2166652 Da；

图 2-1 ME-X 的洗脱曲线Fig 2-1 Chromatogram of ME-X2.3.3 ME-X 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）ME-X 的 HPGPC 结果如下：由图 2-2 可知，ME-X 的 HPGPC 洗脱曲线有一个明显的吸收峰，，峰型较高且成对称结构，后续研究均基于此峰对应区域的多糖。由图 2-3 可知，ME-X 的 Z+1 均分子量（Mz+1）为 2166652 Da；
【学位授予单位】：西华师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285

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本文编号：2648801