石菖蒲—益智仁精油提取工艺及精油吸嗅给药对AD的作用研究

发布时间：2020-05-05 15:58

【摘要】：目的:研究石菖蒲-益智仁精油的提取方法,省睡方水提液和精油的抗AD活性及机制。方法:(1)采用水蒸气蒸馏提取法和超临界CO_2萃取法进行石菖蒲-益智仁精油的提取,用GC-MS法对提取的精油进行成分分析,并运用基于计算机系统的网络药理学方法,构建精油成分-靶点网络、成分-靶点-疾病网络及蛋白作用通路网络图,对不同提取方法所得精油关键成分活性进行预测比较,指导精油提取方法的选择。(2)采用Aβ_(1-42)复制的AD小鼠模型及APP/PS1双转基因AD小鼠模型,以行为学、组织形态学、相关递质含量水平的改变,对省睡方水提液灌胃及精油吸嗅抗AD活性进行研究。(3)采用免疫组化法,分析省睡方水提液及精油干预后小鼠脑内能量相关生化指标的变化,选取葡萄糖转运体1(GLUT-1)及胰岛素通路关键分子1(IRS-1)为指标,观察省睡方防治AD的可能机制。结果:(1)通过GC-MS对两种不同提取方法所得精油进行分析,水蒸气蒸馏法共鉴定出挥发性成分35种,以醚类(54.70%)、烯类(25.82%)、酮类(2.88%)、醇类(1.68%)为主,超临界CO_2萃取法共鉴定出49种,以醚类(37.97%)、烯类(20.26%)、酮类(16.81%)、烷类(7.40%)、醇类(0.92%)为主。(2)通过C-T-D网络的构建,依据degree(度值)分析发现,水蒸气蒸馏提取中度值在8以上的成分有14种,主要为醚、醇、烯类化合物(合计相对百分含量64.12%);超临界萃取中度值8以上的成分有10种,主要为醚、醇、烯类化合物(合计相对百分含量45.35%),而超临界中占比较大的烷类(7.40%)、酮类(16.81%)化合物仅发现茉莉酮(0.22%)具有抗AD的靶点。提示在抗AD活性预测中,醚、醇、烯类化合物起着重要的作用,且水蒸气蒸馏法相关成分的含量多于超临界,超临界提取虽能提取出更多种类的化合物,但与抗AD活性不呈正相关。(3)药效验证中,与正常组比较,模型组跳台实验潜伏期显著收缩,错误次数显著增长(P0.01),Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期明显延长(P0.05,P0.01),海马CA1区神经元出现缺失,DG区出现明显的老年斑沉积(P0.05),ACH含量均显著下降,GABA,GLU水平均显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组均可显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数(P0.01),明显降低定位航行小鼠逃避潜伏期(P0.01,P0.05),可以一定程度保护小鼠海马CA1区神经元,减少DG区老年斑沉积(P0.05,P0.01),明显增加小鼠脑组织中ACH表达(P0.05,P0.01),减少GABA,GLU水平(P0.01)。(4)免疫组化实验中,与正常组比较,模型组GLUT1含量均显著下降(P0.01),IRS-1的表达均显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组明显增加小鼠脑组织中GLUT1表达(P0.05,P0.01),减少IRS-1的表达(P0.01)。结论:水蒸气蒸馏法、超临界CO_2萃取法所获得的石菖蒲-益智仁精油均具有丰富的活性成分,均具有潜在的防治AD的活性,通过吸嗅给药能在动物模型中得到相应的验证,调控神经递质系统、淀粉样蛋白水平及能量代谢是石菖蒲-益智仁精油防治AD的机制之一。
【图文】：

1) 表示剂量单位 μg·mL-1 AD 小鼠海马 CA1 区神经元的影响从尼氏染色结果看，正常对照组小鼠海马 CA1 区神经元排列有序，无明显核固缩术组小鼠海马 CA1 区神经元排列有序，无核固缩。模型组小鼠海马 CA1 区神经组排列混乱，并具有神经元缺失、核固缩现象。各给药组小鼠海马 CA1 区神经元组排列有序，无明显神经元缺失，但也存在疏松、核固缩。见图 1。模型组 - 20.88±4.20精油低剂量组 12.131)22.91±4.99精油高剂量组 48.501)22.44±3.58原方对照组 0.46 21.93±3.16

E图 2 对小鼠海马 CA1 区神经元的影响(尼氏染色，×400)常组；B. 模型组；C. 精油低剂量组(12.13 μg·mL-1)；D. 精油高剂量组(48.50 μg·mL-1)；E. 原照组(0.46 g·kg-1)；n=3/组（图 2 同）1 Effects on morphology in hippocampal CA1 region in AD mice（Nissl’s staining, × AD 小鼠海马 DG区老年斑的影响硫磺素染色结果显示，与正常组小鼠海马比较，模型组海马 DG 区的老年斑沉积升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠海马 DG 区老年斑沉积水平明显<0.05，P<0.01）。见图 2，表 4。A B C D
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TQ461;R285.5

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本文编号：2650398