基于抗NA活性的肿节风质量生物评价方法的建立及应用

发布时间：2020-05-10 20:32

【摘要】：目的:构建基于抗流感病毒神经氨酸酶试剂盒的对清热解毒类中临床常用药—板蓝根、草珊瑚、连花清瘟胶囊的生物活性评价方法的探索研究与应用方法:1.对流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒稳定性、重现性、一致性考察;2.基于抗NA活性的草珊瑚质量评价技术标准化及应用研究;3.基于抗NA活性的中药复方连花清瘟胶囊质量标准化研究;4.基于抗NA的板蓝根活性的质量评价技术标准化及应用研究。结果:1.对流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒稳定性、重现性、一致性考察;同一样品的日内精密度平均抑制率85.34%,RSD1.3%,日间精密度平均抑制率85.39%,RSD2.5%,重复性平均抑制率85.42%,RSD3.15%;同一试剂盒六次冻融平均空白OD值11239.96,RSD5.8%,同一试剂盒六次冻融平均参比OD值1498.48,RSD12.75%,同一试剂盒六次冻融平均抑制率86.61%,RSD1.70%。建议试剂盒在冻融六次内使用。进行了6个实验室的重现性实验,试验间结果没有显著性差异。通过研究发现该方法精密度、重复性良好,可用于评价药物的抑制流感病毒活性。在此基础上建立了流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒标定标准操作规程。2.草珊瑚的抗NA活性质量评价技术标准化及应用:草珊瑚具有抗菌消炎、清热解毒、通经接骨等功效,具有抗菌消炎、抑制流感病毒、促进骨折愈合及抗肿瘤等生物活性,本研究收集了10批草珊瑚进行了化学成分含量测定和特征性图谱的建立,在此基础上应用流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒进行了检测,测定了10批次草珊瑚样品的生物效价,初步探索了草珊瑚(肿节风)的质量控制的生物评价方法。3.连花清瘟胶囊的抗NA活性质量评价技术标准化及应用:收集了18批连花清瘟胶囊进行了化学成分含量测定和特征性图谱的建立,测定了各个批次的生物效价,建立了连花清瘟胶囊的质量评价标准化方法。4.板蓝根抗NA活性质量评价技术标准化及应用:板蓝根为常用的清热解毒药,具有抑制流感病毒活性,测定33批基原清楚的板蓝根药材进行了化学评价和生物效价的测定,建立了板蓝根的质量评价标准化体系,板蓝根的药效物质基础一直都是其研究的薄弱环节,在此基础上,以现行2015版中国药典质控性指标(R,S)-告依春为主要物质基础,研究其和抑制神经氨酸酶活性间的量效关系及相关性,为阐明板蓝根药效物质基础奠定了化学基础并开拓了新的发展方向。结论:本课题在前期研究的基础上对基于流感病毒神经氨酸酶抗病毒活性检测的生物评价试剂盒进行了优化,应用其建立了板蓝根、草珊瑚、连花清瘟胶囊的质量评价技术标准化体系,为清热解毒了中药建立以生物评价为核心的质量评价技术标准化体系打下基础。
【图文】：

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图 1 原理示意图Figure 0-1 Theprinciple diagram一种借助空气飞沫传播，传染性，，寄生性强的病毒，首先侵入人体的呼吸系统。主要原理反应，使得病毒不能复制，最终病毒死亡图.2.流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒Figure.2Assay kitfor detection of anti-NAactivity神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒是由原解放军第三零二全军中医药研究所原

示意图,神经氨酸酶,流感病毒,试剂盒

图.2.流感病毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒Figure.2Assay kitfor detection of anti-NAactivity毒神经氨酸酶抑制效价检测试剂盒是由原解放军第三零二全军中医药研究所原创，有缓冲液、酶、荧光底物组成，储藏、运输条件适宜，并且适用性、可及性、操作图.3.检测程序示意图Figure.3 Schematic diagram of detection program操作步骤简单，所需实验材料较少，检测时间短，比较适用一般科研机构、实验机构及
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284.1

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