对叶百部遗传多样性AFLP分析及止咳作用机制的研究

发布时间：2020-05-11 07:49

【摘要】：目的:本文旨在进行对叶百部遗传多样性AFLP分析及对叶百部总生物碱(TAST,Total alkaloids of Stemona Tuberosa Lour)止咳作用机制研究。方法:1.利用荧光AFLP标记技术,8对EcoR I/Mse I引物组合对38份供试材料的基因DNA扩增,进行多态性检测,用NTSYSpc-2.11F软件进行数据分析。以DICE相似系数为基础而得出UPGMA个体间聚类图和相似系数。2.对叶百部总生物碱(TAST)止咳作用机制研究:(1)采用氨水喷雾复制小鼠咳嗽模型,记录咳嗽次数和咳嗽潜伏期后;在造模和不造模条件下,酶联免疫法(ELISA)检测氨水引咳小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT,5-hydroxytryptamine)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA,5-hydroxyindoleacetic acid)、去甲肾上腺素(NE,norepinephrine)和多巴胺(DA,Dopamine)水平;(2)采用辣椒素喷雾复制豚鼠咳嗽模型,记录咳嗽次数和咳嗽潜伏期;酶联免疫法(ELISA)检测豚鼠空腹血清和肺组织中P物质(SP)水平;采用伊红-苏木素(HE,Hematoxylin-EosinH)染色观察气管和肺组织的病理变化。结果:1.共获得条带数1477条,多态性条带数1477条,多态性达到了100%。UPGMA个体间聚类结果表明,对叶百部种群间的遗传距离与地理距离有相关性。2.与模型组比较,TAST组小鼠咳嗽潜伏期延长,咳嗽次数显著减少(P0.01);TAST中、高剂量组均能显著增加小鼠脑中5-HT水平和5-HIAA水平(P0.01);TAST低、中、高剂量组中NE和DA水平与模型组均无显著性差异(P0.05)。3.与正常组比较,模型组豚鼠血清和肺组织SP水平显著增加(P0.01),气管和肺组织均出现不同程度损伤,气管黏膜增厚和肿胀,肺泡萎陷;与模型组比较,TAST组豚鼠咳嗽潜伏期延长,咳嗽次数显著减少(P0.01),血清和肺组织SP水平显著降低(P0.01),气管和肺组织病理损伤明显减轻。结论:对叶百部不同居群间的遗传多样性丰富,为对叶百部种质资源的合理利用和品种选育提供了分子水平的理论依据;TAST具有明显的止咳活性,其中枢性止咳机制可能是通过增加小鼠脑中5-HT、5-HIAA含量起到止咳活性,但与阿片受体机制能关系不大;外周性止咳机制与其可减轻辣椒素抑制神经肽SP表达有关,也与ATP-K~+抑制剂对其止咳活性有关。
【图文】：

-1供试材料分布图

图 2-1-2 引物组合 E-AAC/M-CAG 的样品 AFLP 图谱注:纵坐标:右侧 marker DNA 片段从下往上依次为 70、80、90、100、120、140、160、180、0、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、425、450、475、490、500 bp;
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2658133