芸豆植物凝集素及其制剂的生殖生物学相关性质研究

发布时间：2020-05-14 06:38

【摘要】：越来越多的研究表明,植物凝集素对生殖过程中包括受精、胚胎着床、胚胎发育及妊娠过程等每一个环节都会产生影响。本实验室从事植物凝集素相关研究已经超过十年。研究表明,植物凝集素能安全有效阻止受精、抑制胚胎着床及终止不同时期的妊娠。目的:本研究采用云南红芸豆植物凝集素(Red Kidney Bean Lectin,RKBL,or Phytohemmaglutinin,PHA),研究长期使用对小鼠阴道结构和组织形态的影响作用;观察RKBL凝胶剂对精子凝集的作用;探究反复使用RKBL终止妊娠对雌鼠妊娠及其后代发育的影响;以及观察给予RKBL后子宫内红芸豆植物凝集素受体或结合位点数量的变化。期望能为研究新型的既能避孕又能预防包括HIV(Human Immunodeficiency Virus,人类免疫缺陷病毒)在内的性传播疾病的杀微生物剂、研究新型引产药物和为生殖医学应用提供理论依据和实验基础。方法:1、将不同浓度的RKBL通过阴道口注入小鼠阴道。连续给药四个月后,断颈处死小鼠,取下其阴道及周围组织,制作石蜡切片并经苏木精染色,显微镜下观察阴道上皮及下层组织的形态学变化。2、采用Sander-Cramer方法,即在0.5ml含不同浓度RKBL的凝胶剂中,加入0.1ml精液,观察20s内致死精子的最低芸豆凝集素剂量,并观察RKBL对精子凝集的有效浓度;在“V”型管底部加入等体积含不同浓度RKBL的凝胶剂,观察杀精和凝集精子的效果。3、以RKBL重复处理孕鼠造成2次流产后,观察对雌鼠第三次妊娠的影响并连续观察新生小鼠生长至21d(即断奶期)的相关生理及神经行为学指标。4、用FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫氰酸荧光素)标记的RKBL凝集素作为探针,研究子宫给药(RKBL)后对RKBL受体或结合位点的数量及分布的影响。结果:1、长期(4个月)阴道连续给予RKBL的实验组小鼠阴道无炎症、病变、过敏反应等不良现象,阴道粘膜上皮细胞形态完好无破损。2、当凝胶剂中RKBL浓度高于或等于1mg/ml时,会使精子瞬间失活致死,即Sander-Cramer方法20s内致死的最低剂量为1mg/ml;RKBL浓度高于0.01mg/ml时,可以不同程度地凝集精子;3、与对照组比较,使用RKBL重复流产不影响雌鼠再次妊娠,但是雌鼠的平均产仔数稍许降低,幼崽生长速度稍快于对照组,其他各项指标均无明显差异。4、RKBL受体广泛存在于小鼠子宫,其中在子宫黏膜(即内膜)部分荧光反应相对较弱,子宫肌层部分和子宫浆膜上荧光较强;给予RKBL处理后,受体分布情况发生变化,子宫黏膜、子宫肌层部分和子宫浆膜上中的荧光反应强度均有不同程度的增加,其中子宫壁肌肉中荧光强度增强尤为明显。结论:1、红芸豆植物凝集素(RKBL)长期作用于阴道安全无不良反应。2、1mg/ml为体外杀精的最低RBKL浓度;各低浓度RBKL凝胶均能使精子产生不同程度的凝集;在“V”型管实验中,各试验浓度的RKBL凝胶剂均能阻止精子穿透。3、RKBL重复(2次)处理导致流产后,对雌鼠无明显不良影响,对子代生长发育无明显负面影响。4、RKBL受体广泛存在于小鼠子宫,给予红芸豆植物凝集素刺激后,受体受体在子宫粘膜、子宫肌层和浆膜都在不同程度上增加。
【图文】：

图 2.1 小鼠不同浓度 PHA 阴道给药苏木精染色阴道切片（图 2.1A：PBS 组 100×；图 2.1B：为图 A 的局部放大 400×；图 2.1C：1mg/ml 浓度的 PHA 组100×；图 2.1D：为图 C 的局部放大 400×；图 2.1E：2.5mg/ml 浓度的 PHA 组 100×；图 1F：为图 E 的局部放大 400×；图 2.1G：5mg/ml 浓度的 PHA 组 100×；图 2.1H：图 G 的局部放大 400×）2.3 讨论实验结果证明，对小鼠进行长期阴道注入浓度为 2.5mg/只或以下浓度的红芸豆植物凝集素（RKBL），不会引起阴道上皮细胞的不良反应，用药组与对照组没有明显差异，应用于阴道是安全的。目前市面上还没有一种安全有效的的杀微生物剂产品。 现阶段很多已经进人体临床试验的药物一般都是凝胶剂型或生物黏附剂型的[41]。常见的杀精子剂为壬苯醇醚-9 或 N9，但壬苯醇醚-9 会引起阴道上皮细胞的破损，而阴道上皮的损伤，又将会增加包括 HIV-1 在内的病毒的感染风险。并且已有实验证明苯醇醚-9

图 3.1 含不同浓度 RKBL 的凝胶剂凝集精子图片（图 3.1A：含 5mg/ml RKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1B：含 2.5mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1C：含1mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1D：含0.5mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1E：含0.25mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1F：含0.1mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1G：含0.05mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1H：含0.025mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1I：含0.01mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1J：含0.005mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×；图 3.1K：含 0.0025mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子100×，右下角小图为其局部放大 400×；图 3.1L：含不 0.001mg/mlRKBL 的凝胶剂凝集精子 100×，，右下角小图为其局部放大 400×）3.2.2 “V 型管”穿透试验结果
【学位授予单位】：云南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2662961