麝香保心丸抗高糖所致心肌损伤的机制研究

发布时间：2020-05-14 11:12

【摘要】：目的:探讨在高糖环境下所诱导的H9c2细胞损伤,通过各因素处置后,测定各个实验组细胞存活率(MTT)、细胞内ROS含量、Honest 33258荧光检测细胞凋亡情况以及各实验组细胞中Nrf2、HO-1的蛋白表达活性的变化,从而说明麝香保心丸抗高糖所致心肌损伤的发生机制之一是否与激活Nrf2/ARE信号通路密切相关,从而进一步完善麝香保心丸治疗糖尿病心肌病的相关机制。方法:(1)细胞存活率检测:经过不同处理因素分别处理24h后使用酶标仪检测各实验处理组吸光度并记录OD值。根据细胞活性情况(细胞存活率(%)=As/Ac×100%)分析并进行各处理组之间细胞存活检测。实验分组:正常对照组(Glu:5.5mmol/L)(normal control,Con组)、高糖损伤组(Glu:35mmol/L)(high glucose,HG)组、高糖+0.5g/L麝香保心丸保护组(HG+0.5g/L SBP组)高糖+1g/L麝香保心丸保护组(HG+1g/L SBP组)、高糖+2g/L麝香保心丸保护组(HG+2g/L SBP组)、高糖+5g/L麝香保心丸保护组(HG+5g/L SBP组)、高糖+10g/L麝香保心丸保护组(HG+10g/L SBP组)共7组;(2)活性氧(ROS)试剂盒检测各处理组细胞中活性氧的水平,实验分组同上;(3)使用Hoechst33258染色通过荧光显微镜观察细胞核改变情况观察不同处理因素处理24h后H9c2细胞凋亡程度,设置为Con组、HG组、HG+2g/L SBP组;(4)蛋白免疫印迹(Western-blot)法:设置为Con组、HG组、HG+2g/L SBP组,24 h后检测各处理组细胞中Nrf2、HO-1的蛋白表达水平。结果:(1)MTT结果显示:H9c2细胞经不同处理因素处理24h后得出各处理组OD值,通过细胞增殖公式计算得出各处理组细胞的存活率,高糖损伤组较正常对照组细胞增殖受到抑制(P0.05);经不同浓度麝香保心丸处理后,同高糖损伤组相比均出现明显增殖,细胞存活数量增加,且以浓度为2g/L麝香保心丸+高糖损伤处理组后细胞活力增加最显著(P0.05)。(2)Honest染色显示:荧光显微镜下发现正常对照组中H9c2细胞的细胞核呈现出正常的蓝色,细胞核形态大小一致、核质均匀等正常形态表现。而高糖组中H9c2细胞的细胞核呈致密浓染而颜色透亮,而细胞核成分裂现象,染色质出现了固缩等细胞凋亡征象。使用2g/L麝香保心丸干预后,细胞凋亡明显减少,表现为细胞核颜色出现透亮的细胞数量明显减少。(3)ROS含量测定:使用酶标仪测量结果显示,高糖损伤组中H9c2细胞内荧光值较正常对照组相比大大增加,表明细胞内ROS含量显著增加;经麝香保心丸处理后,较高糖组比其细胞内ROS含量减少,且呈一定浓度依赖性,并且麝香保心丸的浓度为2 g/L处理H9c2细胞24h后细胞内ROS含量降低更为显著(P0.01)。(4)免疫印迹结果显示:浓度为2g/L麝香保心丸+高糖损伤处理组中心肌细胞中Nrf2、HO-1的蛋白表达水平较单纯高糖损伤组显著增加(P0.05),从而说明麝香保心丸抗高糖所致心肌损伤与激活Nrf2/ARE信号通路密切相关。结论:本研究再次验证了高糖环境(35mmol/L)下可诱导心肌细胞发生氧化应激损伤。也首次说明了Nrf2-ARE信号通路可能参与麝香保心丸改善高糖诱导的H9c2细胞的损伤,并通过抑制氧化应激反应发挥作用。
【图文】：

青岛大学硕士学位论文结 果活力检测 MTT 结果显示：H9c2 细胞经不同处理因素处理 24h 后得出各组 O组细胞的存活率。高糖损伤组较正常对照组细胞增殖受到显著抑制（度麝香保心丸处理后，较高糖损伤组均出现明显增殖，细胞存活增保心丸处理组后细胞活力增加最显著（P＜0.01）。（见图 1）

图 2 不同处理因素处理 H9c2 细胞后（24h）细胞体内 ROS 含量：与对照组相比，P＜0.05；**：与对照组相比，P＜0.01； #：与高糖损伤组相比，##：与高糖损伤组相比，P＜0.01）est 33258 检测结果光显微镜下发现:正常对照组中 H9c2 细胞的细胞核呈现出正常的蓝色，，小一致、核质均匀等正常形态表现。而高糖组中 H9c2 细胞的细胞核呈透亮，而细胞核成分裂现象，染色质出现了固缩等细胞凋亡征象。使用丸干预后，细胞凋亡明显减少，表现为细胞核颜色出现透亮的细胞数量图 3-图 5）
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2663261