巴戟天寡糖对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的实验研究

发布时间：2020-05-14 13:11

【摘要】：目的:研究巴戟天寡糖对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:全骨髓法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增骨髓间充质干细胞的目的,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化情况,流式细胞仪检测分离培养细胞的表面抗原标志;CCK-8实验检测不同浓度巴戟天寡糖(0.5-5000ug/ml)干预组与对照组(0 ug/ml)分别作用于大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)48h后对细胞的毒性作用;使用碱性磷酸酶检测试剂盒检测巴戟天寡糖干预组和对照组成骨诱导7天后碱性磷酸酶活性;采用茜色红染色法检测巴戟天寡糖干预组和对照组成骨诱导14天后钙结节形成情况,以确定巴戟天寡糖对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响;实时荧光定量PCR法检测巴戟天寡糖干预组和对照组成骨诱导7天后成骨相关基因ALP、Col-Ⅰ、Runx2、OCN的表达情况,从基因水平探讨巴戟天寡糖对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响机制。、结果:全骨髓法能有效得到分离纯化的骨髓间充质干细胞,体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞生长形态良好,增殖能力活跃,流式细胞仪检测发现培养的细胞表面抗原标志CD44、CD73、CD90、CD29的阳性率达90%以上,而造血干细胞表面抗原标志CD34、CD45基本不表达,符合骨髓间充质干细胞一般生物学特性;与对照组相比,浓度为(0.5、5、50、500ug/ml)的巴戟天寡糖在48h时对大鼠骨髓间充质干细胞没有毒性(p0.05),而较高浓度的巴戟天寡糖(5000ug/ml)对细胞产生毒性作用(p0.05);与对照组相比,巴戟天寡糖在无毒性浓度范围内(0.5-500ug/ml)成骨诱导7天后,碱性磷酸酶的活性降低;与对照组相比,巴戟天寡糖在浓度为5 ug/ml和50 ug/ml时成骨相关基因(ALP、Col-Ⅰ、Runx2、OCN)的表达量减少(p0.05);成骨诱导14天后,巴戟天寡糖在浓度为5 ug/ml和50 ug/ml产生的钙结节较对照组减少。结论:巴戟天寡糖可能有抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化的作用。
【图文】：

第1代BMSCs（×5）

第1代BMSCs（×10）
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2663399