石见穿诱导乳腺癌细胞凋亡及其分子机制研究

发布时间：2020-05-16 22:22

【摘要】：目的:石见穿是我国的传统中草药,拥有活血化瘀、清热解毒、消肿止痛的功效,常用来治疗感染性疾病和妇科疾病。药理实验研究证明,石见穿拥有良好的抗癌效果,对多种恶性肿瘤均有较好治疗作用。本实验通过制备石见穿含药血清,并作用于乳腺癌细胞MCF-7,观察石见穿对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,及microRNA-21与凋亡蛋白Bcl-2表达的影响,探究石见穿的抗癌机制,为乳腺癌的中医药治疗提供新的临床用药参考与依据。方法:以石见穿为研究对象,筛选32只SPF级雌性SD大鼠,随机分为A、B、C、D四组,分别为石见穿组、中药复方对照组、阳性对照(环磷酰胺)组、空白对照组(生理盐水),每日进行灌胃给药,7日后经腹主动脉采血,分离血清,获得含药血清。用含药血清处理乳腺癌细胞MCF-7,通过CCK8实验观察含药血清作用下乳腺癌细胞的增殖抑制率,并用流式细胞术检测乳腺癌细胞的凋亡情况;运用real-time PCR和Western Blot分别检测microRNA-21和Bcl-2表达水平,探讨石见穿抗乳腺癌的分子机制。结果:1.石见穿对乳腺癌细胞MCF-7的增殖与凋亡的影响CCK8实验结果:含药血清A、B、C组分别作用于乳腺癌细胞MCF-7 24小时,48小时,72小时后,乳腺癌细胞的吸光度逐渐降低,且与浓度的增加成反比。其中10%复方组、20%复方组、10%阳性组的含药血清作用24小时及5%复方组含药血清作用48小时,与同浓度同时间空白对照组(D组)比较,差异有统计学意义(P0.05);20%石见穿组、20%阳性组的含药血清作用24小时,石见穿组的三个浓度组(5%、10%、20%)、10%复方组、20%复方组、阳性组的三个浓度组(5%、10%、20%)作用48小时及石见穿组、复方组、阳性组的三个浓度组(5%、10%、20%)含药血清作用72小时,与同时间同浓度空白组比较,均具有显著性差异(P0.01)。而含药血清作用24小时的5%的石见穿组、复方组、阳性组和10%石见穿组,分别与同浓度同时间空白组比较,差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞术实验结果:20%含药血清作用于乳腺癌细胞24小时后,A组(石见穿组)凋亡率为48%,B组(复方组)凋亡率为38%,C组(环磷酰胺组)凋亡率为75.8%,D组(空白组)凋亡率为1.2%。A、B、C三组凋亡率与D组比较有显著统计学差异(P0.01)。20%含药血清作用于细胞48小时后,A组凋亡率为65.6%,B组凋亡率为47.7%,C组凋亡率为79%,D组凋亡率为1.1%。A、B、C三组凋亡率与D组比较均有显著统计学差异(P0.01)。2.石见穿对miR-21、Bcl-2的表达影响Real-time PCR实验:A、B、C、D组含药血清作用于乳腺癌细胞MCF-748小时后,miR-21的表达量有差异,表达量由低到高依次是C、A、B、D。且A、B、C组与D组之间比较,表达量有显著统计学差异(P0.01)。Western Blot实验:A、B、C、D组含药血清作用于乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,Bcl-2的表达量有差异,表达量由高到低依次是D、B、A、C。且A、B、C组与D组之间比较,表达量有显著统计学差异(P0.01)。结论:石见穿能通过抑制乳腺癌细胞的增殖和促使乳腺癌细胞凋亡起到抗肿瘤的作用,且可下调microRNA-21表达,下调Bcl-2蛋白表达水平,表明石见穿抗癌的机制可能与下调microRNA-21及Bcl-2有关,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和诱导乳腺癌的凋亡,起到抗癌作用。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】