通便汤抑制结肠Cajal间质细胞过度自噬治疗STC的机制研究

发布时间：2020-05-19 07:10

【摘要】：目的:本研究课题通过观察STC大鼠模型的ICC自噬情况,探讨通便汤治疗STC机制及其量效关系。方法:将80只健康SD大鼠随机分为空白组20只,造模组60只。运用复方苯乙哌啶复制STC大鼠模型,随机抽取空白组10只,造模组10只,观察大鼠一般情况(体质量、进食量、饮水量),测定大鼠24h粪便总量和含水量、肠道传输功能、结肠肌电,并运用免疫组化法、蛋白免疫印迹法和PCR法检测ICC及c-kit的表达。停药1w后,检测造模结束1d后、7d后,造模组大鼠24h粪便总量和含水量。STC大鼠模型复制成功后,将造模组剩余的50只随机分为模型组10只,通便汤低、中、高剂量组各10只,莫沙必利组10只,药物干预6w后,观察大鼠一般情况(体质量、进食量、饮水量)、测定大鼠24h粪便总量和含水量、肠道传输功能、结肠肌电,运用透射电镜观察大鼠结肠组织中ICC,蛋白免疫印迹法和PCR法检测c-kit、Beclin1、LC3的表达。结果:1.与空白组相比,造模组大鼠一般情况较差,24h粪便总量和含水量减低(P0.01),炭末推进率降低(P0.01),结肠留存粪便增多(P0.01),肌电图频率和振幅变异程度升高(P0.01),ICC和c-kit表达降低(P0.01)。停药1w后,造模组大鼠24h粪便总量和含水量未见明显改变(P0.05)。2.与空白组相比,模型组ICC细胞结构明显改变,自噬增加;与模型组相比,通便汤治疗6w后,通便汤低、中、高剂量组大鼠体质量增加、进食量增加、饮水量减少(P0.01),24h粪便总量和含水量增多(P0.01),炭末推进率升高(P0.01),结肠留存粪便减少(P0.01),肌电图频率和振幅变异程度降低(P0.01),ICC和c-kit表达升高(P0.01),Beclin1、LC3表达下降(P0.01),并且低、中、高剂量通便汤组间差异有明显统计学意义(P0.01),高剂量通便汤与低、中组间差异显著(P0.01)。3.与模型组相比,莫沙比利组大鼠体质量增加、进食量增加、饮水量减少(P0.01),24h粪便总量和含水量增多(P0.01),炭末推进率升高(P0.01),结肠留存粪便减少(P0.01),肌电图频率和振幅变异程度降低(P0.01),但是ICC和c-kit表达未见明显变化(P0.05),Beclin1、LC3表达未见明显变化(P0.05)。结论:1.运用复方苯乙哌啶成功复制STC大鼠模型,且STC大鼠模型稳定性好,安全性高,可用于后期实验研究。2.通便汤能明显改善STC症状,主要机制可能与下调Beclin1、LC3表达而抑制ICC过度自噬,上调c-kit表达,促进ICC修复有关,从而能刺激肠道蠕动,增加肠道水分。3.通便汤治疗STC与用药剂量有一定联系,高剂量通便汤治疗STC效果最佳。4.莫沙比利通过改善大鼠一般情况(体质量、进食量、饮水量),促进肠道蠕动,增加粪便总量和含水量,增加肠道传输功能治疗STC,但并未抑制ICC过度自噬,其作用机制与抑制ICC过度自噬无关。
【图文】：

鼠造模成功，ＳＴＣ大鼠结肠组织中ＩＣＣ细胞中ｏｋｉｔ明显减少，自噬标志蛋白Ｂｅｃｌｉｎｌ、逡逑ＬＣ３明显增加，大量ＩＣＣ细胞发生自噬是ＳＴＣ大鼠模型制备成功的关键。有具体数值见逡逑表８、９。见图２。逡逑：邋—逦＂邋＂邋．逦Ｔ－逡逑ｗ邋ＪＶｉ．邋Ｌ逡逑Ｂｅｃｌｉｎｌ逦？邋．厕逡逑ＬＣ３逦＊邋一逡逑ＧＡＰＤＨ逦ｍｍｍ逡逑图２邋空白组造模组逡逑表８复方苯乙哌啶造模１２０ｄ后对两组大鼠结肠组织中ｃ－ｋｉｔ、Ｂｅｃｌｉｎｌ、ＬＣ３蛋白表达影响逡逑（ｘ±ｎ邋）逡逑组别逦例数逦ｃ－ｋｉｔ／ＧＡＤＰＨ逦Ｂｅｃｌｉｎｌ／ＧＡＤＰＨ逦ＬＣ３／ＧＡＤＰＨ逡逑空白组邋１０逦１．２９邋土邋０．０７逦０．５７±０．２３逦０．３９±０．２２逡逑造模组逦１０逦０．４５±０．１１＊逦２．０８±０．３１＊逦１．７４±０．４２＊逡逑注：与空白组相比，＊Ｐ＜０．０１逡逑表９复方苯乙哌啶造模１２０ｄ后对两组大鼠结肠组织中ｏｋｉｔ、Ｂｅｃｌｉｎｌ、ＬＣ３邋ｍＲＮＡ表达影逡逑响（ｘ±ｎ邋）逡逑组别逦例数逦ｃ－ｋｉｔ逦Ｂｅｃｌｉｎｌ逦ＬＣ３逡逑空白组逦１０逦１．２９±０．０７逦０．５７±０．２３逦０．３９±０．２２逡逑造模组逦１０逦０．４５±０．１１＊逦２．０８±０．３１＊逦１．７４±０．４２＊逡逑注：与空白组相比，＊Ｐ＜０．０１逡逑２７逡逑

结构未见明显变化。表明通便汤可以减少自噬体和自噬溶酶体的产生，减少线粒体损害，逡逑抑制ＩＣＣ过度自噬，，促进ＩＣＣ修复和生长，并且呈现剂量有相关性，剂量较高，恢复ＩＣＣ逡逑越好。但是莫沙必利不能通过改善ＩＣＣ形态结构治疗ＳＴＣ。见图３。逡逑＿酬逡逑空白组逦模型组逦通便汤低剂量组逡逑■灥逡逑通便汤中剂量组逦通便汤高剂量组逦莫沙必利组逡逑图３药物干预６邋ｗ后各组大鼠结肠组织中ＩＣＣ超微结构逡逑２．４．６药物干预６ｗ后各组大鼠结肠组织中ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表达逡逑免疫组化结果显示，与空白组大鼠相比，模型组大鼠的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ呈现棕色表达的阳逡逑性细胞减少，与模型组相比，通便汤干预的大鼠的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ呈现棕色表达的阳性细胞增逡逑多。运用软件分析各组的小鼠光密度值（ＭＯＤ）发现，与空白组大鼠相比，模型组大鼠逡逑结肠组织中ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表达减少，差异有明显统计学意义（ＰＣ０．０１）。药物干预６邋ｗ后，逡逑与模型组大鼠相比，通便汤低剂量组大鼠结肠组织中的ＩＣＣ、ｃ－ｌｃｉｔ表达明显增多，差异有逡逑明显统计学意义（Ｐ＜０．０１），莫沙比利组大鼠未见明显变化，差异未见明显统计学意义逡逑（Ｐ＞０．０５）。与通便汤低剂量组大鼠相比，通便汤中剂量组结肠组织中的ＩＣＣ、ｃ－ｋｉｔ表达逡逑同样增加
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2670530