生姜、干姜、炮姜姜辣素部位温中作用及组织分布与归经的相关性研究

发布时间：2020-05-25 19:00

【摘要】：目的:建立一种富集姜辣素部位的工艺。观察生姜、干姜、炮姜三种姜的炮制品姜辣素部位对脾胃虚寒模型大鼠的温中作用。在药效学基础上研究三种姜的炮制品姜辣素部位在脾胃虚寒模型大鼠药物代谢情况以及组织分布与归经的关系。方法:①以姜辣素含量为指标,通过考察最大上样量,最佳上样浓度,洗脱溶剂浓度,洗脱剂的体积,洗脱流速等参数对D-101大孔吸附树脂分离纯化姜辣素工艺进行筛选。确定姜辣素的最佳分离纯化工艺。②姜辣素部位对脾胃虚寒模型大鼠的温中作用:SPF级SD雄性大鼠适应性饲养一周,随机分为正常组、模型组、阳性组、生姜姜辣素高(200mg·kg-1)、低(100mg·kg-1)剂量组,干姜姜辣素高(400mg·kg-1)、低(200mg·kg-1)剂量组,炮姜姜辣素高(400mg·kg-1)、低(200mg·kg-1)剂量组,共9组,每组10只。除正常组之外,其余组均灌胃给4℃米醋1mL·100g-1(总酸度≥4g/100mL)连续10d制备大鼠脾胃虚寒模型,造模第五天下午开始给药,阳性组灌胃附子理中丸混悬液6.0g · kg-1,其余各给药组灌胃相应剂量的姜辣素混悬液。造模给药期间观察大鼠外观及行为变化,并比较大鼠第二、四、六、八、十天的进食量、饮水量、体重变化值,脏器系数、胃排空率和血清中胃泌素、胃动素测定值,测得数据用SPSS22.0软件处理,评价炮姜对脾胃虚寒大鼠的温中作用。③姜辣素部位在脾胃虚寒模型大鼠的药物代谢;SPF级SD雄性大鼠适应性饲养一周,随机分为生姜、干姜、炮姜姜辣素高剂量组大鼠。于造模给药后第 11 天灌胃给药后 5min、10min、20min、30min、40min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min 眼眶静脉丛取血,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测得各时间点血药浓度,用DAS软件处理数据得药代动力学参数,并分析各参数意义,研究其药物代谢过程。④姜辣素部位在脾胃虚寒模型大鼠组织分布:生姜、干姜、炮姜姜辣素高剂量组大鼠于给药后 5min、10min、20min、30min、40min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min 时腹主动脉取血,立即采集心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠等组织,联合应用UPLC-MS检测方法对姜辣素部位在大鼠各组织UPLC-MS图谱比较分析,确定有效物质在大鼠各组织中的含量。检测数据用DAS2.0软件处理得到相关药动学参数,通过比较各个指标性成分在各高剂量组大鼠各脏器组织中的最早检测时间、富集浓度、维持时间等探讨姜辣素部位在脾胃虚寒情况下大鼠体内的组织分布和归经情况,并比较生姜、干姜、炮姜在脾胃虚寒大鼠组织分布和归经的差异。结果:①姜辣素富集工艺的最佳条件是最佳上样浓度为0.Sg·mL-1,上样量为4倍量柱体积(4BV),以2BV·h-1速率上样,静置0.5h后,依次用3BV的去离子水和50%乙醇除杂,以2s·d-1的速率用70%乙醇和95%乙醇进行洗脱,洗脱液浓缩,冷冻干燥后得黑色油脂状半固体物质。紫外分光光度计测得生姜含量为82.76%,得率0.33%,干姜含量为87.07%,得率为4.52%,炮姜姜辣素含量为85.87%,得率为4.31%。②在姜辣素部位对脾胃虚寒模型大鼠的温中作用中,发现与模型组比较,生姜、干姜和炮姜的高、低剂量的姜辣素混悬液显著改善脾胃虚寒模型大鼠的外观状态;提高进食量、饮水量;显著增加脾胃虚寒模型体重值;提高大鼠胃排空率;显著增加肝脏系数、脾脏系数和胸腺系数;显著增加血清中GAS、MTL测定值(P0.05或P0.01)。说明姜辣素部位具有温中的功效。③被测组分峰和内标峰仅在给药后血浆样品中可检测到,在空白血浆样品中未检出,专属性好。大鼠血浆中6-姜酚浓度在1.95-499ng·mL-1范围内线性关系良好(R2 = 0.9970);8-姜酚浓度在1.853-250ng·mL-1范围内线性关系良好(R2 = 0.9987);10姜酚浓度在7.81-247.3 ng·mL-1范围内线性关系良好(R2 = 0.9966);姜酮浓度在3.926-251.25 ng·mL-1范围内线性关系良好(R2 = 0.9985)。其日内精密度(相对标准偏差,RSD)均分别小于15.0%,准确度(相对误差,RE)在1.07%—15.21%之间,于4℃条件下放置24h和反复冻融三次的稳定性良好,符合生物样品分析指导原则的要求。脾胃虚寒模型大鼠在灌胃给药不同姜辣素部位后,比较6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮的血浆内血药浓度曲线下面积即AUCO-t,生姜姜辣素AUCO-t依次 6-姜酚姜酮8-姜酚;干姜辣素AUC0-t依次为姜酮8-姜酚6-姜酚;炮姜姜辣素AUCO-t依次为8-姜酚姜酮6-姜酚。④脾胃虚寒模型大鼠体内分布结果显示:在脾胃虚寒模型大鼠中,比较生姜姜辣素部位6-姜酚药物动力学参数在不同组织中AUCO-t的大小为胃小肠大肠肾肺肝脾心;8-姜酚在不同组织中AUCO-t的大小为胃大肠小肠肺肾心脾肝;10-姜酚在不同组织中AUC0-t的大小为胃大肠小肠肺心=肝=脾=肾;姜酮在不同组织中AUCO-t的大小为胃大肠小肠肺=肾肝=心=肾。在脾胃虚寒模型大鼠中,比较干姜姜辣素部位6-姜酚在不同组织中AUCO-t的大小为胃肝大肠=肾=脾小肠心;8-姜酚在不同组织中AUCO-t的大小为胃大肠小肠=肺=肝=脾心肾;10-姜酚在不同组织中AUCO-t的大小为胃小肠大肠肺=肝心肾脾;姜酮在不同组织中AUC0-t的大小为胃小肠大肠肝肺肾心=脾。在脾胃虚寒模型大鼠中,比较炮姜姜辣素部位6-姜酚在不同组织中AUC0-t的大小为胃小肠大肠肝=脾=肺心肾;8-姜酚胃小肠大肠=心=脾=肝=肺=肾;10-姜酚在不同组织中AUCO-t的大小为胃小肠大肠肝肺=脾心=肾;姜酮在不同组织中AUCO-t的大小为胃小肠大肠肝=肺=脾心=肾。结论:药效学实验显示,生姜、干姜、炮姜姜辣素部位具有显著地温中作用,姜辣素是姜温中功效的基础。通过测定血浆中6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮的血浆药物浓度通过脾胃虚寒模型大鼠给药后血药浓度参数的比较,首次考察了其在大鼠体内的药动学行为。充实了 6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚和姜酮药代动力学方面的资料,为进一步临床药代动力学研究提供了参考依据。在脾胃虚寒模型大鼠各剂量组给药后各脏腑组织中其四种成分可不同程度的分布在心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠等脏器组织中,通过综合考虑其在各脏器组织中的最早检测时间、维持时间和富集浓度等得出,姜辣素在脾胃虚寒组大鼠组织分布主要集中在胃、小肠、大肠、肺组织中。这种分布与姜归经的传统认识相同。
【图文】：

姜酚,长扫描,全波

并定容至 25mL，即得 0.2356mg·mL- 1的 6-姜酚标准储备液。2.2.2 供试品溶液的制备精确称取“2.1”项下的干浸膏 10mg 置于 25mL 容量瓶中，，加甲醇声使其完全溶解后，定容至刻度线，混合均匀，即得。2.3 方法学考察2.3.1 样品检测波长的确定精密吸取 “2.2.1”项下的 6-姜酚储备液和 “2.2.2”项下的供试品溶 2.0 mL 放置于 10mL 的容量瓶内，甲醇定容。用紫外分光光度计 190nm~500nm 进行全波长扫描，比较 6-姜酚和样品的全波长扫描图分确定检测波长为 280nm。如图 1-2。

长扫描,全波,姜酚,样品

2.0 mL 放置于 10mL 的容量瓶内，甲醇定容。用紫外分光光度计在190nm~500nm 进行全波长扫描，比较 6-姜酚和样品的全波长扫描图分析确定检测波长为 280nm。如图 1-2。图 1 6-姜酚全波长扫描图
【学位授予单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】