葵花盘的炮制加工及饮片质量评价方法研究

发布时间：2020-05-27 02:33

【摘要】：目的:葵花盘资源丰富,随着近年来的深入研究逐渐应用于临床。花盘以海绵体为主要组成,水分含量高,干燥处理失水速率慢,采收加工、炮制及贮藏不当均易滋生霉菌,影响药材(饮片)的质量和疗效。本研究以葵花盘为研究主体,针对特定疗效,采用“精准炮制”优化产地加工及炮制一体化工艺,形成了具有中医药特色的饮片,显著降低霉变发生概率。制定葵花盘霉变评价方法,并建立完善的饮片质量控制标准,对葵花盘相关产品的生产开发和质量监管有重要意义。方法:1.建立葵花盘总蛋白及总黄酮含量测定方法,采用UV、MS等多种分析技术对葵花盘不同产地、不同部位黄酮类及蛋白类成分分布进行比较分析,并采用生物信息学软件对蛋白质的生物学进程、分子功能和细胞进程进行分析。2.分离制备葵花盘霉变标志物,以薄层色谱为基础建立霉变评价方法,并收集12种霉变药材对方法的适用性进行考察。3.针对特定疗效,施行“个性化炮制”,分别选择原药材、临床偏用于抗痛风的饮片、偏用于平肝止痛的饮片为最优样本制备精准饮片,以葵花盘总黄酮、总蛋白、不同极性浸出物含量为指标,结合灰色关联度法综合优化葵花盘一体化工艺。4.结合前期研究结果,对吉林省内13个产地葵花盘饮片的水分、灰分、总黄酮及总蛋白含量等进行测定。结果:1.不同产地、不同部位葵花盘黄酮及蛋白类成分分布均有明显差别,4个产地葵花盘中共鉴别出20种蛋白质。2.葵花盘、槐米、陈皮、人参等霉变样品的薄层色谱与霉变标志物相比,均显相同荧光斑点。3.不同一体化工艺制备的饮片浸出物、总黄酮、总蛋白含量有一定的差别,其中总蛋白含量以阴干处理最高,总黄酮含量以60℃烘干处理最高。灰色关联度分析60℃烘干块与原药材、偏用于平肝止痛的饮片关联度最大;阴干块与临床偏用于抗痛风的饮片关联度最大,但放置一段时间易生飞蛾。4.根据13批葵花盘饮片水分、灰分、霉变检查、总黄酮、总蛋白含量等测定结果,建立了完善的葵花盘饮片质量控制标准。结论:不同产地的葵花盘蛋白质分布有差异,生物学进程、分子功能和细胞进程存在一定交叉。总黄酮的含量分布具有生境和部位选择性,同一产地不同部位总黄酮含量由高到低依次为:膜质托片苞片花梗残基海绵体。建立的葵花盘霉变评价方法灵敏、专属性强,葵花盘一体化工艺优化为“鲜品除杂、洗净、切制块状、60℃烘干”,所制定的葵花盘饮片质量控制标准合理可行,能够保证葵花盘临床应用安全稳定有效,为中药霉变的防治、安全性评价及质量控制方法的研究提供了新思路。
【图文】：

操作流程,乙腈

11段进行检测。质谱结果分别采用Masco（tversion 1.6）和Proteome Discovery（version 2.1）生物分析软件进行分析，操作流程如图2。图2 操作流程2.6.1相关参数设置2.6.1.1液相参数设置0-90 min：乙腈-0.1%甲酸水溶液（5:95）至乙腈-0.1%甲酸水溶液（30:70），流速：300nL/min90 -93 min：乙腈-0.1%甲酸水溶液（30:70）至100%乙腈，，流速：300nL/min93 -100 min：100%乙腈，流速：300nL/min2.6.1.2质谱参数设置离子碎裂方式为碰撞诱导解离（CID），采用母离子全扫描模式，离子质荷比：200-1800，电喷雾电压：2000 V，无辅助气体，碰撞气体：He，将数据导入ProteomeDiscoverer

比较图,葵花盘,颜色差异,不同产地

3.1总蛋白含量目测法对上清液颜色进行比较，4种样品溶液颜色有差异，样品4（洮南市）最深，样品3（长春市）次之，样品1（安广市）和样品2（大安市）颜色较为相似，见图3。葵花盘不同样品蛋白测定结果表明蛋白含量与样品液的颜色无相关性，见表1。图 3 不同产地葵花盘药材提取液颜色差异比较图表 1 提取液颜色与蛋白含量关系比较样品提取液颜色排序（深→浅，1→4）蛋白含量/%1 3 18.712 3 12.323 2 8.544 1 18.503.2不同产地葵花盘蛋白质相对含量比较从4个产地的葵花盘药材中共鉴别了出20种蛋白质，样品1至4号分别鉴定出14、20、3、12种蛋白质。样品2与样品1的对比结果显示，两个样品共鉴别出9种共同存在的蛋白质，相对含量差异见图4A；有5种蛋白质仅由样品1鉴别出，11种蛋白质仅由样品2鉴别出，相对含量差异见图4B；两种样品的蛋白质分布见图4C；蛋白质详细信息见表2。
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R283;R284.1

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