巴戟天水提液对大鼠KOA关节软骨Ⅱ型胶原蛋白的影响

发布时间：2020-05-28 01:29

【摘要】：目的:观察巴戟天治疗大鼠KOA关节对Ⅱ型胶原蛋白的影响,并对实验大鼠血清中IL-1、TNF-α、MMP3、MMP13进行检测,通过免疫组化法检测关节滑膜及软骨中Ⅱ型胶原的表达,最后对实验结果进行分析。方法:30只雄性实验大鼠,适应性喂养7天,随机数字表法分5组,分别为空白对照组(K组)、模型试验对照组(S组)、巴戟天低浓度组(BL)、巴戟天中浓度组(BM)、巴戟天高浓度组(BH),每组6只。除K组外,全部按照碘乙酸药物诱导法进行造模。大鼠使用水合利醛进行腹腔麻醉后仰卧位固定,使用备皮刀脱去膝关节周围毛发,完整暴露大鼠膝关节,碘伏消毒3次后,轻度弯曲大鼠膝关节在其右膝关节腔内注射0.1 mL碘乙酸溶液(1 mg/mL),注射完成后轻柔弯曲膝关节数次,使碘乙酸溶液充分浸润关节腔。对侧作为空白对照。后期以确定造模成功。造模后常规喂养2周,等待炎症反应形成。在造模后每天用游标卡尺记录造模膝关节周径,与K组对比,发现在造模1-2天后造模的4组大鼠膝关节周径明显增大,且大鼠活动减少。在造模2周后,从造模各组随机选取1只大鼠,解剖双膝关节,肉眼观察到右膝关节关节软骨明显毛糙,软组织粘连明显,部分滑膜可见溃疡形成,说明造模成功。造模2周后,空白对照组(K组)不做任何干预,仅为常规饲料喂养。模型试验对照组(S组)每天1次生理盐水灌服,低、中、高浓度造模组分别给予巴戟天浓度为4g/Kg、8g/Kg、16g/Kg干预,每天1次灌服巴戟天药物,给药浓度与剂量:人和动物间按体表面积计算等效剂量比值,按单位体重的剂量来计算,大鼠的等效剂量为正常人的6.3倍。药物干预4周后,全部5组大鼠以5%水合氯醛麻醉后,以真空取腹主动脉血后处死,留取血液标本,于离心机中离心,留取血清标本,用ELISA法进行IL-1β、TNF-α蛋白表达分析;ELISA法进行MMP-3、MMP-13蛋白表达分析。统一切开大鼠右膝关节,小心剥离滑膜及关节软骨,分别置于冻存管中,并及时置于-80℃超低温冰箱中。采用免疫组化检测各组滑膜及软骨中II型胶原的表达。结果:基于细胞因子检测结果进行分析,巴戟天低、中、高浓度组IL-1β血清浓度均低于模型对照组(P0.01)。另外,巴戟天不同浓度组TNF-α、MMP3、MMP13血清浓度均显著低于模型对照组(P0.01)。根据免疫组化检测滑膜及软骨中Col-II表达水平,通过检测结果发现,无论是滑膜还是软骨中,巴戟天不同浓度组Col-Ⅱ表达均高于模型组(P0.05)。结论:我们可以证明通过巴戟天治疗KOA关节后,其对Col-Ⅱ表达水平有促进作用,从而达到保护关节软骨,减轻炎症的目的。不仅如此,巴戟天在治疗KOA关节的过程中,对细胞因子如IL-1β、TNF-α及基质金属蛋白酶有明显的抑制作用。就此,通过本实验我们可以发现,巴戟天是通过抑制促炎症因子和基质金属蛋白酶的分泌,以及促进Col-Ⅱ表达水平,协同作用下最大限度对软骨细胞起到保护作用,消除炎症反应,减轻临床症状。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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