雷公藤低毒高效部位药效、安全性评价研究

发布时间：2020-05-29 00:02

【摘要】：雷公藤是一种对类风湿性关节炎、肾病综合征等难治性疾病具有确切疗效的传统中药,大量研究显示雷公藤及其主要成分如二萜、三萜等成分具有广泛的药理活性,尤其在抗炎和免疫抑制作用方面。目前临床上雷公藤及其提取物制剂广泛用于治疗类风湿性关节炎、肾病综合征、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病,疗效确切,但由于雷公藤具有较大毒性使得很多患者无法坚持长期服用,顺应性差。目前市售雷公藤制剂多为雷公藤经简单提取纯化后制成的普通制剂,其化学成分复杂,药效及毒性物质基础亦不明确,质控指标选择和质量控制评价方法差别较大,致使不同厂家生产的雷公藤制剂在疗效和毒副作用方面存在较大差异,另外其毒副作用耐受问题并未有效解决,使其临床应用受限。因此,在明确雷公藤药效和主要毒性成分的基础上,通过改进提取纯化工艺,制备低毒高效的雷公藤制剂,建立稳定可靠的质量控制方法,是促进雷公藤制剂研发和保证安全用药的可行思路。本课题组前期以此为思路进行探索和研究,在建立雷公藤指纹图谱的基础上,以谱效分析为指导,明确了雷公藤的主要药效成分和毒性成分,并利用硅胶色谱法制备了多个不同药效和毒性成分比例的纯化部位。本研究在此基础上,通过体内外药效和毒性实验研究,评价课题组前期制得的雷公藤不同纯化部位的药效和毒性差异,优选低毒高效部位,并评价其抗类风湿性关节炎活性和安全性,为后续雷公藤低毒高效制剂研发和建立质量标准奠定基础。本课题体外实验研究对象为课题组前期纯化方案所得的18个纯化部位:石油醚-乙酸乙酯洗脱方案(方案A)得部位A1～A8,二氯甲烷-甲醇洗脱方案(方案B)得部位B1～B10。以市售雷公藤多苷片(江苏美通)为参照。以脂多糖(LPS)诱导小鼠脾淋巴细胞炎症模型,以TNF-α和IL-6为评价指标考察各纯化部位的体外抗炎活性;以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠脾淋巴细胞免疫抑制模型,以IFN-y和IL-2为指标考察各纯化部位体外免疫抑制活性;以正常心肌细胞H9c2、肝细胞L-02、肾小球系膜细胞GNM-SV40考察各纯化部位的体外毒性作用。结果显示B3、B7和B10药效较强且毒性小,较符合低毒高效的要求,故选择其进行后续体内药效和毒性研究。体内实验以B3、B7和B10为研究对象,以市售雷公藤多苷片为参照。以角叉菜胶致大鼠足趾肿胀和二甲苯致小鼠耳肿胀为炎症模型考察B3、B7和B10体内抗炎活性;以小鼠迟发型超敏反应为免疫抑制模型考察体内免疫抑制活性;以佐剂性关节炎大鼠为试验模型考察抗类风湿性关节炎活性作用;以小鼠急性毒性和大鼠长期毒性为试验模型考察安全剂量范围和体内毒性作用。体内药效实验结果显示B3、B7和B10均具有较强的药效活性,且B10活性作用最强;毒性试验结果显示B10的毒性作用最小,优势最明显。故最终确定B10为最优低毒高效部位。本研究最终确定纯化部位B10为雷公藤低毒高效部位,并确定了低毒高效部位的提取纯化工艺,为后续雷公藤低毒高效制剂的研发和质量标准的建立奠定了基础,同时对促进雷公藤制剂的安全用药具有重要意义。
【图文】：

指纹图谱,雷公藤,指纹图谱,药材

图５八个产地雷公藤药材ＨＰＬＣ指纹图谱逡逑Ｓ１：福建；Ｓ２：湖南；Ｓ３：云南；Ｓ４：安徽；Ｓ５：广东；Ｓ６：广西；Ｓ７：湖北；逡逑Ｓ８：江苏逡逑Ｆｉｇ．５邋Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｈｉｃ邋ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ邋ｏｆ邋８邋ｂａｔｃｈｅｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ邋ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ邋Ｈｏｏｋ．ｆ．逡逑（ＳＩ：邋Ｆｕｊｉａｎ；邋Ｓ２：邋Ｈｕｎａｎ；邋Ｓ３：邋Ｙｕｎｎａｎ；邋Ｓ４：邋Ａｎｈｕｉ；邋Ｓ５：邋Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ；邋Ｓ６：邋Ｇｕａｎｇｘｉ；逡逑７：Ｈｕｅｉ；Ｓ８：邋Ｊｉａｎｓｕ）逡逑

雷公藤内酯酮,雷公藤甲素,雷酚内酯,雷公藤

图６雷公藤对照指纹图谱逡逑（３：雷公藤甲素；６：雷公藤内酯酮；１４：雷酚内酯；１８：雷公藤次碱；２９：逡逑雷公藤红素；３１：雷公藤内酯甲；３５：扁塑藤素）逡逑Ｆｉｇ．６邋Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ邋ｏｆ邋Ｔｒｉｐｉｅｒｙ＾ｉｕｍ邋ｗｉｌｆｏｒｄｉｉ邋Ｈｏｏｋ．ｆ．邋ｓｕｂｓｔａｎｃｅ逡逑（３：邋Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ；邋６：邋Ｔｒｉｐｔｏｎｉｄｅ；邋１４：邋Ｔｒｉｐｔｏｐｈｅｎｏｌｉｄｅ；邋１８：邋Ｗｉｌｆｏｒｉｎｅ；邋２９：邋Ｃｅｌａｓｔｒｏｌ；逡逑ｒ
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】