牛樟芝提取物对黑素细胞的影响

发布时间：2020-05-30 23:56

【摘要】：牛樟芝是一种名贵的药用菌类,含有多种药理活性成分,包括萜类化合物、多糖、蛋白、苯醌类、芳香类、脂类等,具有保肝护肝、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗氧化、调节免疫力和治疗肿瘤等多种神奇功效,具有极高的研究价值。黑素细胞起源于神经嵴细胞,是合成和分泌黑色素的树突状细胞。资料表明,黑素细胞除合成和分泌黑色素外,还参与皮肤免疫过程。黑素细胞功能异常会引起白化、白癜风等多种疾病。本研究采用原代培养的黑素细胞和市售牛樟芝提取物,从细胞生长增殖、细胞凋亡、因子水平、黑色素合成率和细胞迁移等方面,探究牛樟芝对黑素细胞的活性和功能的影响。方法:1.原代细胞提取,参照公开发表的方法,选用儿童包皮组织利用酶消化法去除无关组织,筛选纯化黑素细胞。将获取的黑素细胞进行传代培养,并进行左旋多巴染色和免疫吸附验证。2.活性研究:利用MTT法检测牛樟芝提取物对黑素细胞增殖的影响,建立多巴胺体外诱导黑素细胞氧化应激凋亡模型,并依据此凋亡模型检测牛樟芝提取物对黑素细胞凋亡的保护作用。3.功能研究:使用Elisa试剂盒法检测牛樟芝对黑素细胞促炎性细胞因子水平的影响,采用多巴胺反应速率法检测牛樟芝对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响。利用NaOH裂解黑素细胞检测黑色素合成量,检测并计算牛樟芝对黑色素合成率的影响。最后,用Transwell小室法检测牛樟芝提取物对黑素细胞迁移作用的影响。结果:1.左旋多巴染色和免疫吸附验证结果显示,本研究成功提取纯化了人原代黑素细胞。镜下观察细胞形态统一,突起相互连接,鉴定结果显示染色纯度较高,未见角质细胞污染。2.MTT结果显示,牛樟芝能够显著促进黑素细胞增殖,并对氧化应激引发的细胞凋亡有显著抑制作用。3.功能研究结果显示,牛樟芝能够降低黑素细胞促炎性细胞因子分泌,提高酪氨酸酶活性,提升黑色素合成,促进黑素细胞迁移。结论:本研究成功提取并纯化了人黑素原代细胞。实验证明,牛樟芝提取物能够促进人黑素细胞增殖,并对氧化应激诱导的黑素细胞凋亡有保护作用。此外牛樟芝提取物还能够降低黑素细胞促炎性细胞因子水平,提高黑色素合成率,促进黑素细胞迁移,为牛樟芝治疗白癜风提供理论基础。
【图文】：

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图 4.1 原代黑素细胞第 3 代细胞镜下观察形态图注： Bar=20μm.4.4.2 黑素细胞鉴定结果左旋多巴又称左多巴，，由酪氨酸形成儿茶酚胺反应的中间产物，同时也是种抗震颤麻痹药物。在人体毛发黑色素形成过程中就有左旋多巴的存在，左旋巴与金属离子经氧化反应会呈现棕黑色，因此左旋多巴在染发行业广为使用Giemsa 染料包含两种物质，分别为 May-Grunwald 染料和 Giemsa 染料May-Grunwald 即曙红亚甲基蓝Ⅱ，对细胞质亲和性较好，能将细胞质染成蓝至棕色，Giemsa 则主要亲和细胞核，将细胞核区域染成褐色。两者相互辅助在细胞生物学实验中应用广泛。经左旋多巴处理和 Giemsa 染色鉴定，镜下观察可见细胞形态自然，没有缩和凝聚现象。胞体圆润，树突长而圆滑，细胞质及树突被染料染成棕蓝色，胞核区域被染成棕褐色(如图 4.2 所示)。

黑素细胞,培养的,细胞突起,图注

图 4.2 原代黑素细胞 L-Dopa 染色结果图注： Bar=10μm.如图 4.3 所示，培养的原代细胞着色明显，细胞突起和胞质染成棕黄色，胞内 S-100 蛋白表达水平较高，符合人黑素细胞的特征。镜下观察可见细正常，所有细胞几乎全部着色，表明所培养的原代细胞为高纯度的黑素细胞
【学位授予单位】：齐鲁工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

【参考文献】