基于能量代谢探讨黄芪颗粒对H22荷瘤小鼠化疗增效机制的研究

发布时间：2020-06-01 10:02

【摘要】：[目的]实验研究显示黄芪具有辅助抗肿瘤作用,已在临床上得到了证实。氟尿嘧啶是一种广谱抗肿瘤药物,课题组对H22荷瘤小鼠采用氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)化疗1周,而后给予黄芪颗粒1周,发现化疗后给予黄芪颗粒可以明显抑制肿瘤的增殖,巩固化疗疗效。通过qPCR实验检测发现化疗后黄芪颗粒给药组的糖酵解重要基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)表达明显降低,为明确其机制,我们拟从肿瘤相关巨噬细胞和缺氧诱导因子-1α(hypoxiain-duciblefactors-1alpha,HIF1α)进行研究,尝试阐明黄芪通过改善糖酵解产生化疗增效作用的机制。[方法]1、药效试验昆明小鼠30只,随机分成模型组(M)、氟尿嘧啶组(5FU)、5FU化疗后给予黄芪颗粒高中低剂量组,于小鼠右侧前肢腋窝皮下注入0.2 mL 1.5×10~7个.mL~(-1)的H22细胞悬浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日开始给药,前7日除M组注射生理盐水外,其它各组均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M组和5FU组灌胃生理盐水,化疗后黄芪高、中、低剂量组灌胃相应剂量黄芪溶液。给药结束后,统计分析各组小鼠的体重及瘤体体积,并以此为判断依据选择最佳的给药剂量的筛选。2、黄芪颗粒对化疗药抗肿瘤增效作用昆明小鼠18只,随机分成模型组(M)、氟尿嘧啶组(5FU)、5FU化疗后给予黄芪颗粒中剂量组(H),于小鼠右侧前肢腋窝皮下注入0.2 mL 1.5×10~7个.mL~(-1)的H22细胞悬浮液,建立肝癌模型小鼠。造模次日开始给药,前7日除M组注射生理盐水外,其它各组均腹腔注射5FU溶液;自第8日起,M组和5FU组灌胃生理盐水,H组灌胃中剂量黄芪溶液。给药结束后,统计分析各组小鼠的瘤体体积及HE染色结果,并以此为判断依据黄芪颗粒对化疗药抗肿瘤增效作用。3、机制探讨采用实时定量PCR法(qPCR)检测PGK1、HIF1α、乳酸脱氢酶A(Lactate Dehydrogenase A,LDHA)、丙酮酸激酶2(Pyruvate kinase isozymes M2,PKM2)mRNA表达量;采取蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HIF1α的表达;通过免疫组织化学的方法,观察肿瘤组织中CD68、CD163、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)阳性细胞的表达情况,光镜下计数染色阳性细胞数并进行统计分析。试图从能量代谢角度探讨化疗后给予黄芪颗粒对H22荷瘤小鼠化疗增效机制的研究。[结果]1、对小鼠体重的影响:与M组比较,各给药组荷瘤小鼠体重均显著性降低,且其余各组组间在前7天注射氟尿嘧啶时无显著性差异。但随着中药的给药时间延长,联合给药的三个组体重增加趋势明显,且为后给药的高、中剂量组体重增加最明显。2、对荷瘤小鼠体积的影响:瘤体体积:与M组比较,5FU组、H组小鼠的肿瘤体积减小,具有显著性差异(分别为P0.01,P0.001);与5FU组比较,H组瘤体有显著减小(P0.01)。3、HE染色结果:肿瘤细胞向周围骨骼肌组织大面积侵袭,炎性细胞浸润,大量新生血管形成以及细胞核呈不对称分裂象,提示肿瘤细胞生长增殖能力极强。4、qPCR结果:与M组比较,5FU组无统计学意义,H组小鼠PGK1的mRNA表达量均降低,且有显著性差异(P0.001);与5FU组比较,H组PGK1的mRNA表达量降低,有显著减小(P0.001)。与M组比较,5FU组无统计学意义,H组小鼠LDHA的mRNA表达量均降低,且有显著性差异(P0.05);与5FU组比较,H组LDHA的mRNA表达无统计学意义。与M组相比,5FU组、H组的PKM2、HIF1α的mRNA表达量无统计学差异。5、Western blot显示:与M组相比,5FU组、H组的HIF1α的蛋白表达量无统计学差异。6、免疫组织化学实验结果:与M组相比较,5FU组无统计学意义,H组CD68、CD163、IL-6阳性细胞数均明显减少,且有显著性差异(均为P0.001);与5FU组相比,H组CD68、CD163、IL-6阳性细胞数亦明显降低,具有显著性差异(均为P0.001)。[结论]1、黄芪颗粒的最佳给药剂量为化疗后给予黄芪剂量为25mg·kg~(-1);2、黄芪颗粒可增强5FU的抗肿瘤作用,能抑制肿瘤细胞对周围正常组织及骨骼肌组织的侵袭和破坏,在肿瘤细胞侵袭、炎性细胞浸润、血管新生、细胞核分裂等病理表现改善更为明显。3、在肿瘤细胞中,化疗后给予黄芪颗粒通过抑制极化的M2型巨噬细胞的表达,减少IL-6的分泌,进而抑制PGK1的表达,从而达到改善肿瘤细胞能量代谢,发挥抗肿瘤的作用;而非通过抑制HIF1α,进而抑制其下游PGK1活化来抑制肿瘤细胞能量代谢。
【图文】：

荷瘤小鼠体重的影响（接种后前七天）（n on the weight of H22 bearing mice(In the firs荷瘤小鼠体重的影响（接种后后七天）（ts on the weight of H22 bearing mice（After seM 组比较，接种后前七天给药组均注射化疗，且各组间体重无明显差异。由图 2 可知

*P<0.05，***P<0.001；与 5FU 组比较图 3 对荷瘤小鼠肿瘤体积的影响（n=6Effects on the size of tumor tissue of H22 bea 组比较，给药组各组小鼠的肿瘤体积减小性差异(分别为 P<0.05，P<0.05，P<0.05)，001)；与 5FU 组比较，5FU+H 中组瘤体体药组体积减少不明显，且无统计学意义。验可行性好。化疗后给予黄芪高中低剂量组的荷瘤小鼠体用了化疗后给予黄芪中剂量组(H 组)为有验也综合黄芪对化疗后荷瘤小鼠体重和肿瘤H 组)进行后续实验，，实验结果一致。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 叶敏君;;黄芪颗粒联合阿昔洛韦治疗复发性阿弗他溃疡的疗效观察[J];河北医科大学学报;2010年12期

2 李琴;;孟鲁斯特联合黄芪颗粒在儿童咳嗽变异性哮喘中的疗效观察[J];吉林医学;2013年21期

3 张玉清;;黄芪颗粒防治儿童反复呼吸道感染的临床观察[J];西部医学;2012年01期

4 梁军;;黄芪颗粒制作工艺研究[J];黑龙江医药;2012年03期

5 辛朝雄;谢华丽;杨俭;吴小霞;邱哲;;黄芪颗粒辅助治疗淋巴结结核的临床观察[J];现代医院;2012年11期

6 刘超;;黄芪颗粒对紫癜性肾炎后续治疗的疗效观察[J];川北医学院学报;2011年01期

7 刘超;;黄芪颗粒对紫癜性肾炎后续治疗的疗效观察[J];华西医学;2010年01期

8 叶世武;;黄芪颗粒治疗小儿多汗症的临床疗效观察[J];儿科药学杂志;2009年02期

9 邱亿腾,周才,李容汉,林少勇,曾丽;黄芪颗粒辅佐治疗小儿反复呼吸道感染的疗效观察[J];实用医学杂志;2004年07期

10 郑浪花;林慧;曾活;;黄芪颗粒对原发性高血压动态动脉硬化指数的影响[J];中国当代医药;2016年01期

相关会议论文 前9条

1 黄殷;徐培菊;;黄芪颗粒治疗小儿反复呼吸道感染的临床疗效[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年

2 段雪云;吴松涛;;防己黄芪颗粒的质量标准研究(摘要)[A];中华中医药学会2014第七次临床中药学术研讨会论文集[C];2014年

3 张爱华;曹卫华;魏爱风;黄丽红;;黄芪颗粒对早期糖尿病肾病疗效的研究[A];全国首届代谢综合征的基础与临床专题学术会议论文汇编[C];2004年

4 李白恩;康国贵;;黄芪颗粒对儿童单纯性肾病综合征免疫功能的影响[A];2008年浙江省肾脏病学术年会论文汇编[C];2008年

5 陈腾;简桂花;李军辉;汪年松;;黄芪颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏中TLR4/MyD88信号通路影响[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年

6 戴宇文;傅海东;刘爱民;陈业欢;;黄芪颗粒对儿童单纯性肾病综合征治疗作用的研究[A];庆祝浙江省中西医结合学会成立三十周年论文集粹2011[C];2011年

7 陈腾;;黄芪颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏中TLR4/MyD88信号通路的影响[A];中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2018年学术年会论文摘要汇编[C];2018年

8 张源;;黄芪颗粒和孟鲁司特钠治疗儿童哮喘疗效观察[A];第十一次全国中西医结合儿科学术会议论文汇编[C];2004年

9 姚明;;亚急性皮肤型红斑狼疮1例[A];2017全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C];2017年

相关重要报纸文章 前1条

1 俞淑敏（上海市第一人民医院儿内科副主任医师）;宝宝长期咳嗽怎么办[N];上海中医药报;2005年

相关硕士学位论文 前9条

1 李影;基于能量代谢探讨黄芪颗粒对H22荷瘤小鼠化疗增效机制的研究[D];江西中医药大学;2019年

2 李双双;黄芪颗粒对过敏性紫癜患儿免疫功能的影响[D];湖北中医药大学;2019年

3 叶蓁;非索非那定体内探针法考察多剂量黄芪颗粒对人体P-gp活性影响的随机、安慰剂对照研究[D];浙江大学;2010年

4 韦练;复方石斛黄芪颗粒的药学研究[D];成都中医药大学;2013年

5 崔雪梅;黄芪颗粒提高猪、鸡免疫功能和生长性能的临床试验[D];河北农业大学;2013年

6 杨红梅;黄芪中黄芪甲苷提取工艺研究和黄芪颗粒的制备[D];广西大学;2017年

7 周玲娟;黄芪联合西药治疗儿童原发性肾病综合征系统评价[D];山东中医药大学;2009年

8 孙京惠;玉丹荣心丸治疗儿童反复呼吸道感染气阴两虚型的临床和实验研究[D];北京中医药大学;2007年

9 刘丹;脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性及黄芪的解毒作用研究[D];南京农业大学;2013年

本文编号：2691315