基于JNK信号通路探讨生脉注射液逆转胃癌多药耐药机制研究

发布时间：2020-06-05 17:07

【摘要】：目的:以胃癌SGC7901/VCR裸鼠耐药移植瘤为实验动物模型,从体内实验研究生脉注射液逆转人胃癌裸鼠移植瘤多药耐药性,并初步探讨其信号通路作用机制,为进一步寻找有效的胃癌多药耐药逆转剂提供实验依据。方法:1.耐药细胞株SGC7901/VCR的培养及MTT法检测其多药耐药性。2.通过皮下移植建立人胃癌耐药裸鼠移植瘤模型及检测其多药耐药性,将裸鼠随机分为生理盐水组、5-Fu组、生脉注射液组(以下简称生脉组)、5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组,观察裸鼠生长状态并绘制肿瘤生长曲线图,计算移植瘤平均瘤重及抑瘤率。3.采用流式细胞术(FCM)检测裸鼠移植瘤瘤细胞凋亡率:获取细胞荧光信号后经细胞周期分析软件进行分析。4.Western Blot检测生脉注射液对人胃癌裸鼠移植瘤P-gp及c-jun、p-c-jun表达的影响:以蛋白印迹在胶片上的曝光程度来表达耐药蛋白的高低。5.RT-PCR检测生脉注射液对人胃癌裸鼠移植瘤MDR1、MRP1表达的影响:以基因扩增产物琼脂糖凝胶电泳的光密度半定量值来表示耐药基因表达的高低。结果:1.SGC7901细胞及SGC7901/VCR细胞均为贴壁生长,呈上皮样单层排列状,SGC7901细胞边界清晰,以多角形为特点。SGC7901/VCR以胞核较大的梭形细胞为主,胞浆内及培养液中可见许多泥沙样颗粒。胃癌细胞耐药性检测结果显示:SGC7901/VCR细胞对5-Fu、ADM、VCR、DDP的耐药倍数分别为27.45、4.62、16.74、2.65。不仅对VCR具有耐药性,对5-Fu、ADM、DDP亦有耐药性,其中以对5-Fu的耐药倍数为最高。证明SGC7901/VCR细胞具有多药耐药性。裸鼠移植瘤细胞(SGC7901/VCR/nude)耐药性检测结果:SGC7901/VCR/nude对5-Fu、ADM、VCR、DDP的耐药倍数(RI)分别为26.79、5.35、13.98、2.48,有交叉耐药性,表明裸鼠移植瘤细胞具有多药耐药性。2.各组皮下移植瘤生长特点及病理形态基本相似,病理组织学检查均为低分化腺癌,成功建立胃癌多药耐药裸鼠移植瘤模型。模型组瘤重、瘤体积与5-Fu组、5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组比较,P0.05,差异均有统计学意义。模型组瘤重、瘤体积与生脉组比较无统计学意义,P0.05,说明生脉注射液无抑瘤作用。5-Fu组、生脉组瘤体积、瘤重分别与5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组比较,P0.05,差异显著。5-Fu+异搏定组瘤重、瘤体积与5-Fu+生脉组相比,P0.05,差别有统计学意义。3.各组耐药移植瘤细胞凋亡率比较:各组耐药移植瘤细胞均有不同程度的凋亡。其中,5-Fu+生脉组凋亡率最高,与模型组、5-Fu组、生脉组、5-Fu+异搏定组比较,P0.05,差异均有统计学意义。说明生脉注射液增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤力,加快诱导肿瘤耐药细胞凋亡。4.Western Blot结果显示:模型组p-gp、c-jun、p-c-jun的表达与生脉组、5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组比较,差异显著(P0.05)。说明生脉注射液降低耐药p-gp,提高c-jun及其磷酸化表达。模型组p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表达与5-Fu组比较,P0.05,差别无统计学意义。5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表达与生脉组比较,差异有统计学意义(P0.05)。说明联合用药降低p-gp、提高c-jun及其磷酸化能力更为显著。5-Fu+异搏定组p-gp、c-jun、p-c-jun蛋白的表达与5-Fu+生脉组相比,P0.05,差别无统计学意义。说明生脉注射液降低p-gp,提高c-jun及其磷酸化的表达与异博定作用相当。5.RT-PCR结果显示:生脉组、5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组MDR1、MRP1基因的表达均低于模型组,差异显著(P0.05)。说明生脉注射液降低耐药基因MDR1、MRP1表达。模型组MDR1、MRP1表达与5-Fu组比较,P0.05,差别无统计学意义。生脉组MDR1、MRP1表达显著低于5-Fu组,P0.05,差别有统计学意义。5-Fu+异搏定组、5-Fu+生脉组MDR1、MRP1表达均低于生脉组,差异有统计学意义(P0.05)。说明联合用药降低MDR1、MRP1更为显著。5-Fu+异搏定组与5-Fu+生脉组相比,P0.05,差别无统计学意义。说明生脉注射液降低MDR1、MRP1基因表达与异博定持平。结论:1.人胃癌SGC7901/VCR细胞具有多药耐药性。2.成功建立具有多药耐药性的人胃癌SGC7901/VCR/nude皮下移植瘤模型,为研究肿瘤耐药提供实验基础。3.生脉注射液联合化疗能抑制胃癌耐药裸鼠移植瘤生长;增加化疗药物对胃癌细胞的杀伤力,加速诱导肿瘤细胞凋亡。4.生脉注射液具有逆转胃癌多药耐药的作用,其作为逆转剂值得进一步研究。5.逆转耐药机制:生脉注射液通过提高JNK通路下游底物c-jun及其磷酸化水平的表达,降低MDR1/p-gp的表达,降低耐药基因MDR1、MRP1的表达,一定程度上逆转胃癌多药耐药。
【学位授予单位】：山西省中医药研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：2698352