基于肠—肝轴研究田黄方改善非酒精性脂肪性肝病小鼠糖脂代谢紊乱的作用及机制

发布时间：2020-06-06 06:52

【摘要】：背景:非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)全球患病率在逐年升高,造成严重的临床和经济负担,已成为全球性健康问题。目前尚无完全确切的治疗方法与基于充足证据的临床指南以支持某药的治疗效果,开发新型药物是健康所趋,肠-肝轴成为NAFLD新型治疗方式。目的:本文以肠-肝轴为切入点,研究田黄方对NAFLD小鼠糖脂代谢紊乱的机制可能是改善肠道屏障功能和胆汁酸代谢。方法:1.C57/BL 6J雄性小鼠给予20周高脂饮食,诱导建立NAFLD模型,随机分组为正常组、高脂模型组、阳性药阿托伐他汀钙组、田黄方低剂量组、田黄方高剂量组,给予12周的灌胃治疗;2.称量小鼠体重、肝重量、肌肉重量,肝脏和睾周脂肪组织HE染色、肝脏油红O染色;3.采用试剂盒检测小鼠空腹血糖、胰岛素、糖耐量试验和血浆中TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量;RT-PCR检测脂质生成基因Perlipin2、CD36、C/EBPα、FAS、SCD1、PPARα、lipin1等脂质代谢相关基因表达量;4.ELISA检测血浆中LPS含量,Western blot检测其信号下游TLR4、NF-κB蛋白在肝脏表达量,RT-PCR检测肝脏中炎症相关基因表达量;5.收集小鼠粪便,采用16SrDNA测序检测田黄方对肠道微生物丰度、多样性、某些与代谢相关菌落丰度的影响;6.采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光检测田黄方对小肠、大肠中紧密连接分子(Calduin-7、occludin、Calduin-1、Calduin-2、Calduin-3、Calduin-4、Calduin-18)基因和蛋白的表达情况以及Proglucagon、GLP-2mRNA的表达情况;7.采用RT-PCR检测田黄方对小肠、大肠中TNFα、IL-6、IL-1β、IL-10等炎症基因表达的影响;8.采用RT-PCR检测田黄方对肝脏和肠道中FXR、SHP、FGFR4、FGF15、CYP7A1、CYP7B1、CYP8B1等胆汁酸代谢相关基因表达的影响。结果:1.造模过程中,高脂饮食小鼠体重持续增加;高脂模型组小鼠的空腹血糖、胰岛素、HOMA-IR、血浆中TG、TC含量较正常饮食组均显著性升高;2.与高脂饮食模型组相比,田黄方可明显减少肝脏重量、脾指数,肝脏HE染色和油红O染色脂滴减少,睾周脂肪HE染色的细胞体积明显减小;3.与高脂饮食模型组相比,田黄方可显著性降低空腹血糖、胰岛素、HOMA-IR、曲线下面积和血浆中TG、TC、LDL-C水平,显著性升高血浆中HDL-C;田黄方可显著性降低肝脏中TG、TG含量和perlipin2、C/EBPα、CD36、FAS、SCD1 mRNA表达量,显著性升高肝脏中PPARα、lipin1和ACOX-1 mRNA表达量;4.与高脂饮食模型组相比,田黄方可显著性降低血浆中LPS含量,降低肝脏中TLR4、NF-κB和TNFα、IL-6、IL-1β的mRNA表达量;5.与高脂饮食模型组相比,田黄方可降低肠道微生物OTUs、Shannon index,降低厚壁菌门丰度、厚壁菌门/拟杆菌门比例,显著性升高疣微菌门的丰度;6.与高脂饮食模型组相比,田黄方可升高小肠、大肠中claudin-7、occludin、ZO-1、GLP2、GCG的mRNA表达量,增加肠道中紧密连接分子claudin-7、occludin、ZO-1、Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3、Claudin-4的蛋白表达;7.与高脂饮食模型组相比,田黄方可降低小肠、大肠中TNFα、IL-6、IL-1βmRNA表达量,升高IL-10 mRNA表达量;8.与高脂饮食模型组相比,田黄方可抑制肝脏和肠道中FXR、SHP、FGFR4和FGF15 mRNA表达量,升高肝脏中胆汁酸合成酶CYP7A1、CYP7B1、CYP8B1 mRNA表达量。结论:1.田黄方可显著改善NAFLD小鼠的脂质沉积、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱和肝脏炎症;2.其机制与改善肠道生物屏障、机械屏障、免疫屏障和胆汁酸代谢有关。
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示意图,示意图,药科大学,疾病谱

广东药科大学硕士毕业论文第一章序言1.1 研究背景1.1.1 NAFLD 的简介非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝脏损伤，疾病谱包括非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（Nonalco-holic steatohepatitis, NASH）及其肝硬化和肝癌。肝细胞中脂质过度沉积引起脂肪变性，进而出现 NASH 的炎症反应、肝细胞坏死和纤维化，最后导致肝癌。

肠道菌群,共同作用,肠道微生物,屏障

图 1-2 膳食因素、肠道菌群与肠屏障损害共同作用于 NAFLDFigure1-2.The interplay between dietary factors, gut microbiota, and gut barrier damage in thedevelopment of NAFLD[37]按照肠屏障防御功能的不同可分为微生物屏障、机械屏障（连接分子）和免屏障。肠道微生物约有 1014个细菌和古生菌，一千多个物种，，总重量约有 1-2g[38]。肠道微生物紊乱包含微生物群落数量和种类的变化、代谢活性和分布的改[39, 40]，菌群失调在 NAFLD 病理生理中产生重大的影响。在近 30 年研究中，肠
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

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