金水六君煎对COPD阴虚痰饮证大鼠的影响及其治疗机制

发布时间：2020-06-06 09:46

【摘要】：目的:实验研究金水六君煎及其拆方对COPD阴虚痰饮证模型大鼠的影响,检测其血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量变化,观察其黏蛋白MUC5AC,MUC5B基因表达的变化,探讨金水六君煎治疗COPD阴虚痰饮证的作用机制,为金水六君煎治疗COPD阴虚痰饮证的临床应用提供实验依据。方法:从60只清洁级SD雄性大鼠中随机抽选10只作为空白组;其余50只为造模组。对造模组大鼠采用气道内滴入脂多糖+烟熏+肌肉注射地塞米松的方法制备COPD大鼠阴虚痰饮证模型。造模成功后,将造模组大鼠随机分为模型组、金水六君煎组(全方组)、养阴组、化痰组、阿奇霉素组,每组10只。空白组,模型组大鼠采用生理盐水灌胃,其余四组分别给予等量相应药物治疗,连续用药14天。动态观察整个实验过程中各组大鼠的一般情况。末次灌胃后禁食12h处死大鼠,采集血液与肺组织标本。应用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察肺组织炎症及纤维化情况;采用过碘酸雪夫(PAS)染色计算杯状细胞数量;通过免疫组化观察肺组织MUC5AC,MUC5B蛋白表达;通过ELISA检测血清IFN-γ、IL-1β、IL-4、TNF-α含量变化;通过RT-PCR观察肺组织黏蛋白(MUC5AC、MUC5B)基因表达的变化。结果:1.各组大鼠一般情况的变化:与模型组对比,各治疗组大鼠呼吸频率减慢,气喘,烦躁易激惹等症状均有减轻,活动度较之前增强,二便情况均有改善。2.各组大鼠肺组织病理学变化:空白组无明显变化。模型组呈明显炎细胞浸润。与模型组相比,各治疗组炎症及纤维化情况得到改善。3.与正常组比较,模型组IFN-γ含量明显增加(P0.05),IL-1β、IL-4、TNF-a含量变化无明显差异。与模型组比较,全方组、养阴组及化痰组IFN-γ含量均明显减少(P0.05);全方组及养阴组TNF-α含量增多(P0.05);各组IL-β、IL-4表达无明显差异。4.气道杯状细胞计数:模型组大鼠支气管上皮杯状细胞的数量显著高于空白组[(90.17±16.47)个vs(16.00±10.20)个,P0.05];全方组,化痰组,阿奇霉素组大鼠支气管上皮杯状细胞的数量均低于模型组[(58.17±22.99)个vs(90.17±16.47)个,(58.33±23.48)个vs(90.17±16.47)个,(60.07±18.47)个vs(90.17±16.47)个,P均0.05];养阴组大鼠支气管上皮杯状细胞的数量与模型组间差异无统计学意义[(87.07±15.47)个vs(90.17±16.47)个,P0.05];全方组,化痰组和阿奇霉素组的杯状细胞数量差异无统计学意义[(58.17±22.99)个vs(60.07±18.47)个,(58.33±23.48)个vs(60.07±18.47)个,P均0.05]。5.MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA的表达变化:与空白组相比,模型组大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表达显著上升[(5.44±2.84)vs(1.08±0.74),(5.61±1.91)vs(1.09±0.56),P均0.05];与模型组相比,全方组,化痰组,养阴组,阿奇霉素组大鼠黏蛋白MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表达均下调(P均0.05);与阿奇霉素组相比,全方组能显著下调MUC5AC mRNA,MUC5B mRNA表达(P0.05)。结论:提示COPD阴虚痰饮证大鼠模型存在炎症反应与黏蛋白MUC5AC、MUC5B基因高表达。金水六君煎能减少IFN-γ含量,减少黏蛋白MUC5AC,MUC5B的分泌,在转录水平抑制COPD阴虚痰饮模型MUC5ACmRNA、MUC5B mRNA的表达。
【图文】：

⑶RNA 的琼脂糖凝胶电泳电泳槽用 3%的双氧水（处理 0.5h；配制１%变性琼脂糖凝胶20ml 1xTAE buffer，加热至琼脂糖溶解，冷至 60℃,加入 0.5核酸染料，混匀后倒胶；取 3μl 提取的 RNA，按 1:5 的比例与premix 混匀，，140V 恒压电泳，溴酚蓝前沿迁移至凝胶总长 2/3胶成像系统下观察。条带由上至下依次为 28s，18s，5s，说明 RNA 完整性较好（定容至 100ul，在 260nm 与 280nm 处测其吸光度值，并计算浓度（ng/ul）=A260*稀释倍数*40，浓度在 100ng/ul-5=OD260/OD280，比值在 1.8-2.0 之间均可。

湖南中医药大学整。⑵模型组大鼠 HE 染色可见有大小不等的肺小泡形成，肺泡间隔破坏，小支气管扩张，气管上皮粘膜脱落，管腔内炎性分泌物，气管壁变型，管壁周围及肺间质可见淋巴细胞及中性粒细胞浸润。⑶全方组，化痰组，养阴组，阿奇霉素组呈轻度炎症变化，支气管黏膜未见明显脱落，基底膜增厚不显著，支气管管壁以及周围炎性细胞浸润等症状得以改善。⑷养阴组呈轻度炎性改变，可见支气管黏膜脱落。如图 2，图 3。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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本文编号：2699500