中药虎杖活性成分的分离及抗肝纤维化作用研究

发布时间：2020-06-06 12:03

【摘要】：研究背景及目的肝纤维化是多种原因引起的慢性肝损害所致的病理改变,表现为肝内细胞外间质成分过度异常地沉积,并影响肝脏的功能,是慢性肝病发展到肝硬化必经之阶段。肝纤维化发病过程中,肝星状细胞的活化增殖是核心环节。虽然现己明确肝纤维化是个可逆的过程,但是现代医学临床上迄今仍没有能够逆转它的药物。“肝纤维化”当属于中医“ve积”、“胁痛”等病范畴,近年来各项研究表明中药复方、中药单药及某些中药成分或提取物在抗肝纤维化治疗中发挥了良好的作用。中药虎杖为蓼科植物虎杖的干燥根及根茎,药用历史悠久。现代研究认为虎杖清热利湿解毒之功与现代医学中的保肝利胆、抗菌、抗病毒作用相关,但尚无实验研究揭示虎杖抗肝纤维化的作用及具体机制。据此,本实验以活化的大鼠肝星状细胞HSC-T6为体外细胞模型,采用细胞活性与药物分离相结合的方法,对虎杖抗肝纤维化作用及活性成分进行探究,以期从虎杖中发掘出明确具有抗肝纤维化作用的有效成分,从而为研制出抗肝纤维化的药物提供依据。研究方法1.药物分离、鉴定技术(1)水提法制备得到虎杖浸膏,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对浸膏进行萃取,分别得到各极性部位;(2)采用溶剂系统分离法结合高效液相色谱法,对各极性部位分离;对分离得到的单体进一步纯化;(3)应用现代波谱技术(质谱法、核磁共振波谱法等)对上述获得单体化合物进行鉴定和分析,确定其化学结构。2.活性验证细胞模型:大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞株(1)CCK-8试剂盒检测各极性部位对HSC-T6细胞活化增殖的影响;(2)采用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法,荧光显微镜下观察有效成分对HSC-T6细胞增殖的影响;(3)免疫印迹法(Western Blot)检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。3.数据统计计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS21.0软件包分析数据,以P0.05为差异有统计学意义。实验结果1.虎杖乙酸乙酯部位对HSC-T6细胞增殖有较强的抑制作用,石油醚部位次之,正丁醇部位作用较弱;2.从虎杖乙酸乙酯部位分离得到大量淡黄色针状晶体,经鉴定其结构为大黄素甲醚;3.与对照组相比,大黄素甲醚可抑制HSC-T6细胞增殖,且呈浓度依赖性;4.EdU染色实验中,大黄素甲醚组阳性细胞数目及所占比例均显著小于对照组(P0.001);5.Western Blot结果显示大黄素甲醚在10μmol/L和20μmol/L时可降低Bcl-2表达水平(P0.001),同时升高Bax水平(P0.001)。
【图文】：

逦第二章前期实验基础２．部分中药单体化合物结构鉴定逡逑２．１白花丹：白花丹酸逡逑从白花丹乙酸乙酯部位分离得到大量黄色油状物，经鉴定为白花丹酸，分逡逑子式为ｃ？ｈ９ｎ３ｏ３。逡逑Ａ逡逑

图３－１虎杖萃取物制备流程图逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ邋ｏｆ邋Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ邋ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ逡逑２．１实验材料逡逑２．１．１药材：上步制备所得虎杖干浸膏。逡逑２．１．２试剂：石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇，均为分析纯试剂，，购自广州化逡逑学试剂厂。逡逑２．１．３仪器：５Ｌ分液漏斗，ＥＹＥＬＡ旋转蒸发仪系统（具体规格同表３－１）。逡逑２９逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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1 陈姝延;孙亚朦;尤红;;肝纤维化诊断的新进展[J];中华肝脏病杂志;2017年08期

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4 黄尹;李国锋;;不同产地虎杖中各成分含量的比较[J];中医药信息;2015年05期

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6 李长栋;荔志云;季玮;孙建军;杨永林;;大黄素甲醚对脑损伤大鼠bcl-2、bax表达变化的影响[J];中华神经外科疾病研究杂志;2015年03期

7 王靖思;孙桂芝;陈兰羽;刘玉琴;顾蓓;;肝纤维化中医认识[J];吉林中医药;2015年05期

8 陈剑明;张声生;吴震宇;郭前坤;高月;马增春;;虎杖苷对非酒精性脂肪肝保护作用的实验研究[J];中华中医药学刊;2015年05期

9 童妍;金钊;;大黄素甲醚的药理作用研究进展[J];中华中医药学刊;2015年04期

10 过忆;薛博瑜;;肝纤维化的细胞和分子机制[J];重庆医学;2015年09期

本文编号：2699646