基于RAW264.7细胞的白芷和黑莓籽多糖免疫增强功能评价

发布时间：2020-06-07 23:33

【摘要】：免疫系统具有维持机体正常生命活动的重要功能,机体依据免疫系统来判断“自己”和“非己”成分,消灭外来病菌及人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞,从而保持机体的平衡状态。很多研究证实,植物多糖可相对安全地提高人体免疫功能。我们课题组前期对白芷和黑莓籽多糖进行提取纯化,共得到了9个组分,其中组分ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2富集量较大,并且体外实验证实以上组分均具有一定的抑制酪氨酸酶活性和抗凝血活性,查阅文献发现,与白芷和黑莓籽多糖的免疫学研究还未见报道,因此本文采用ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2进行免疫活性研究。巨噬细胞在免疫系统中通过吞噬和提呈抗原,释放细胞因子来参与免疫反应的各个阶段,在机体免疫系统中占有非常重要的地位。巨噬细胞有两种极化类型:M1型和M2型。M1细胞表现为促炎症反应,维持Th1依赖性免疫反应,产生炎症介质(如IL-1、IL-6、IL-12、NO、TNF-α)吞噬微生物或感染/变异细胞;M2细胞表现为抗炎症反应,增强Th2应答,释放出抗炎症因子(IL-4、IL-10、TGF-β),分泌精氨酸酶1,促进Th2细胞化学引诱物的产生。目前文献报道的大多数生物活性多糖表现为促进巨噬细胞M1极化,可以刺激巨噬细胞IL-1、IL-6、IL-12和TNF-α的表达,促进Th1导向的适应性免疫应答,抑制Th2应答。本文选用小鼠RAW264.7巨噬细胞系为细胞模型,脂多糖LPS为阳性对照组,检测白芷多糖ADPs-1a和ADPs-3a以及黑莓籽多糖BSP-2的免疫调节功能及潜在作用机制。首先使用不同浓度的ADPs-1a(100~1600μg/mL)、ADPs-3a(37.5~600μg/mL)和BSP-2(37.5~600μg/mL)刺激RAW264.7细胞,采用MTT法检测细胞活力,中性红法测定细胞吞噬能力,一氧化氮试剂盒和ELISA试剂盒分别测定细胞内NO、TNF-α和IL-6含量,实时定量PCR法测定iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平,Western blot法测定NF-κB和MAPK信号中关键蛋白在使用通路抑制剂前后的表达水平,探讨了ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2对巨噬细胞免疫调控作用的可能机制。ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2能显著提高RAW264.7细胞的吞噬活性,以及RAW264.7细胞释放NO的能力和分泌细胞因子TNF-α、IL-6的水平。在此基础上,ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2也能显著上调iNOS和IL-6、TNF-α的基因表达水平,以及细胞核内磷酸化p65蛋白水平,初步说明ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2能够促进NF-κB由胞浆转入细胞核中进行表达。同理,检测发现MAPK通路中p38 MAPK、ERK1/2、SAPK/JNK蛋白磷酸化水平也显著提高,并且使用通路抑制剂预处理后,蛋白p65、p38 MAPK、ERK1/2、SAPK/JNK的磷酸化水平明显降低。以上结果表明ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2对巨噬细胞的免疫调节作用可能与激活MAPK和NF-κB信号通路有关。本实验结果为ADPs-1a、ADPs-3a和BSP-2的进一步应用开发提供了理论依据。
【图文】：

多糖,信号通路

图 1-1 多糖激活巨噬细胞的 NF-κB 和 MAPK 信号通路图F-κB and MAPK signaling pathways of polysaccharide-activated m究的目的和意义

活力,细胞吞噬,细胞活力,细胞的

2-1ADPs-1a（A）和 ADPs-3a（B）对 RAW264.7 细胞活力的影响 Effects ofADPs-1a (A) andADPs-3a (B) on the viability of RAW264.7 Ps-1a 和 ADPs-3a 对 RAW264.7 细胞吞噬能力的影响能力会直接影响到细胞的活力，本研究结果如表 2-10 与图
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

【参考文献】