楸叶泡桐种子的化学成分及活性筛选

发布时间：2020-06-08 07:50

【摘要】：楸叶泡桐种子为玄参科泡桐属植物楸叶泡桐的干燥种子。据《药性论》记载:“治五淋,沐发去头风,生发滋养。”作为我国传统中药,其根、皮、花、叶、果实均可入药。长期以来,泡桐主要用来治疗咳嗽、痰多、咽喉肿痛、支气管炎、淋病等疾病。现代医学研究表明泡桐还具有抗肿瘤、抗哮喘等作用。目的对楸叶泡桐种子的化学成分进行系统研究,并对分离得到的单体化合物进行胆碱酯酶和黄嘌呤氧化酶抑制活性研究,探讨苯乙醇苷类与香叶基黄酮类化合物黄嘌呤氧化酶抑制活性与结构的关系。方法应用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱、制备HPLC色谱、重结晶等手段,对楸叶泡桐种子的正丁醇和乙酸乙酯部位进行化学成分的系统研究,根据理化性质并运用ESI-MS、UV、HRESIES、H-NMR、C-NMR、IR、HMBC、HMQC等波谱技术及化学方法对所分得的单体化合物进行结构鉴定。应用紫外分光光度法对分离得到的化合物进行胆碱酯酶抑制活性测定,通过HPLC法对分离得到的香叶基黄酮类和苯乙醇苷类化合物进行了黄嘌呤氧化酶抑制活性的研究,测定IC_(50)值,并测定了活性较好化合物的酶动力学常数及酶抑制类型。结果从楸叶泡桐种子中分离纯化得到27个化合物,鉴定其结构分别为:4',5,7-三羟基-3'-甲氧基-6-[3,7-二羟基-3,7-二甲基-2(E)-辛基]黄酮醇(1),3',5,7-三羟基-4'-甲氧基-6-[7-羟基-3,7-二甲基-2(S)-辛烯]二氢黄酮(2),4',5,5',7-四羟基-6-[6-羟基-3,7-二甲基-2(E)-7-辛二烯]-3'-甲氧基二氢黄酮(3),Isopaucatalinone B(4),Prokinawan(5),3,3',4',5,7-五羟基-6-[7-羟基-3,7-二甲基-2(E)-辛烯基]二氢黄酮醇(6),6-geranyl-4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavanone(7),3,3',4',5,7-五羟基-6-[6-羟基-3,7-二甲基-2(E),7-辛二烯]二氢黄酮醇(8),Tomentin E(9),Tomentin D(10),(2S)-2-(4-羟基-3-甲氧基苯)-5-羟基-8-(4-羟基-4-甲基戊基)-8-甲基-2,3,7,8-四氢吡喃并[3,2-g]吡喃-4(6H)-酮(11),(2S)-2-(4-羟基苯基)-5-羟基-8-(4-羟基-4-甲基戊基)-8-甲基-2,3,7,8-四氢吡喃并[3,2-g]吡喃-4(6H)-酮(12),6-geranyl-3,4',5,7-tetrahydroxy-3'-methoxyflavanone(13),Guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether(14),Erythro-(7S,8R)-guaiacylglycerol-β-coniferyl aldehyde ether(15),Isoacteoside(16),Acteoside(17),Ilicifolioside A和Isoilicifolioside A混合物(18),Plantalloside(19),Orobsnchosid(20),Tomentoside(21),Campneoside I(22),Darendoside B(23),Apigenin(24),Luteolin(25),Cistanoside F(26),Linarin(27)。对从楸叶泡桐种子分离得到的27个化合物进行了抗胆碱酯酶活性研究,活性筛选结果表明化合物5、6、8与16具有较高的双重胆碱酯酶抑制活性,但与阳性对照药多奈哌齐相比其IC_(50)偏高。其中化合物16的IC_(50)值较小,对胆碱酯酶具有较好的抑制作用。对分离得到的8个苯乙醇苷类和12个香叶基黄酮类化合物运用HPLC方法进行了黄嘌呤氧化酶活性的初步探究,结果显示化合物5,16,19,22抑制率较好,从而对这四个化合物进行进一步的探究,包括IC_(50)值以及酶动力学活性的测定。结论从楸叶泡桐种子中分离纯化得到27个化合物,包括2个新化合物:1,2。7个种首发化合物分别为:6,8,16,17,18,22,25;8个属首发化合物:5,14,15,19,20,21,23,26。胆碱酯酶活性筛选结果表明化合物5、6、8、16具有较高的双重胆碱酯酶抑制活性,但与阳性对照药多奈哌齐相比其IC_(50)偏高。其中化合物16的IC_(50)值较小,抑制胆碱酯酶的作用较高。HPLC法测定黄嘌呤氧化酶抑制活性,初步探究结果表明化合物5,16,19,22抑制率较好,并存在一定的量效关系。通过对反应速率的测定,然后1/V对1/S作双倒数曲线,结果显示:化合物5,16,19都是混合型抑制。
【图文】：

反应体系的方法，加入黄嘌呤储备充分振摇启动反，15，20，25 min 后，然后在反应液中加入 500 L娃哈哈纯净水定容到刻度，取 20 L 进行 HPLC样品重复测定 3 次，求尿酸峰面积的平均值。由平的斜率即为反应速率。在不同样品浓度（2.0，1.5，1.0，，0.5 mM）下测定酶动力学常数和酶的抑制类及双倒数曲线作图，即可得到 Km和 Vm值。准曲线的建立5 25 50 100 200 3.7501 2.4966 7.1073 15.5421 28.3940 43.

楸叶泡桐种子的化学成分及活性筛选根据黄嘌呤标准曲线方程的建立，运用外标法可以计算出反应液黄嘌呤的浓度以计算出黄嘌呤氧化酶的抑制率。.2 温度对反应体系的影响化合物 16 19 22 5温度 黄嘌呤峰面积25℃ 1.7949 5.0194 0.1459 1.405430℃ 0.8134 2.930 0.1174 0.242135℃ 8.679 8.5708 9.1293 8.034340℃ 0.217 0.5485 0.1031 0.111845℃ 0.1142 0.1736 0.0999 0.0996
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R284;R285

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本文编号：2702768