淫羊藿苷促后肢缺血大鼠模型血管新生的作用及机制研究

发布时间：2020-06-11 05:56

【摘要】：目的:探索淫羊藿苷(ICA)对后肢缺血大鼠模型血管新生的作用及可能的作用机制。方法:动物实验采用单侧股动脉结扎并离断制备后肢缺血大鼠模型,实验随机分组:空白+ICA 40 mg/kg,模型组,模型+ICA 10 mg/kg,模型+ICA 20 mg/kg,模型+ICA 40 mg/kg。HE染色观察细胞形态变化,血管造影观察血管侧支循环,毛细血管密度检测微血管数量,免疫组织化学检测内皮细胞增殖,以及Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF),VEGFA,血管生长因子受体2(VEGFR_2),p-VEGFR_2,蛋白激酶B(Akt),p-Akt,内皮型一氧化氮合酶(eNOS),p-eNOS的水平。细胞实验采用人微血管内皮细胞(HMEC-1),ICA单独给药,以及加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY 294002及eNOS抑制剂L-NAME后,观察ICA对HMEC-1增殖作用的影响,并采用BrdU酶联免疫吸附试验观察HMEC-1增殖情况,Western blot检测VEGF,VEGFA,VEGFR_2,p-VEGFR_2,Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS蛋白水平。结果:动物实验中,与空白组相比,模型组腓肠肌呈缺血样改变,给予ICA后缺血样损伤明显改善;血管造影及免疫组化结果表明,与空白组相比,模型组可见部分侧支血管生长及内皮细胞增殖,微血管生长明显减少,与模型组相比,ICA给药后缺血肢体的侧支循环、内皮细胞增殖及微血管生长明显增加;Western blot显示,与空白组相比,模型组VEGF,VEGFA,p-VEGFR_2,p-Akt及p-eNOS蛋白表达均明显减少,经ICA给药后上述蛋白水平显著增加。细胞实验中,与空白组相比,ICA给药明显促进HMEC-1的BrdU水平;与空白组相比,ICA给药组促进HMEC-1增殖后的VEGF,p-VEGFR_2,p-Akt及p-eNOS蛋白表达;加入PI3K抑制剂LY 294002及eNOS抑制剂L-NAME后ICA诱导HMEC-1的增殖作用被抑制。结论:ICA具有促进缺血肢体血管生成的作用,其机制与激活VEGF介导的PI3K/Akt-eNOS信号通路相关。
【图文】：

义医学院硕士学位论文 陆小凤2 结果.1 ICA 对单侧后肢缺血大鼠模型的缺血性损伤的影响根据股动脉血运的组织支配，结扎离断后腓肠肌缺血受损明显，，故采用腓肠观察药物作用。腓肠肌横断面 HE 染色显示，缺血后细胞胞质嗜酸性增强，细体积减小，细胞核消失，肌纤维间隙增宽[28]。如图 1 所示，腓肠肌细胞出现缺性改变。给予 ICA 后，与模型组相比，腓肠肌细胞体积、肌细胞核及肌纤维隙均有所改善。

义医学院硕士学位论文 陆小凤.4 HMEC-1 细胞的鉴定HMEC-1 细胞贴壁生长 24 h 后，细胞呈多角形，胞质均匀透明，可见细胞“铺路石”样排列。经内皮细胞特异性标记物 CD34 抗体行免疫荧光化学染色鉴，发现细胞 CD34 阳性表达率为 100 %，PBS 对照组细胞浆无荧光（图 4）。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

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本文编号：2707471