益肺散结方部分组分激活自噬干预小鼠肺纤维化的实验研究

发布时间：2020-06-11 10:54

【摘要】：目的:本研究选取云南省名中医李庆生教授临床治疗经验方“益肺散结方”中具有逐瘀作用的莪术、三七,观察其主要活性成分莪术醇、姜黄素、三七总皂苷干预小鼠肺纤维化的作用及机理,探讨其能否缓解肺纤维化,及是否通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路增强肺组织细胞自噬水平来干预肺纤维化,为临床防治该疾病提供了新的思路。方法:1.复制小鼠肺纤维化的模型及分组:采用博来霉素雾化的方法复制小鼠肺纤维化的模型,每天1次,造模时间共7天,本实验分为空白组、模型组、益散组分(益肺散结方部分组分)干预组、吡非尼酮组、抑制剂组;2.制备药物及药物干预:按照益肺散结方中莪术醇、姜黄素、三七总皂苷比例制备益肺散结方部分组分预混液,益散组分干预组、抑制剂组给予益肺散结方部分组分预混液灌胃;吡非尼酮组给予吡非尼酮灌胃;抑制剂组给予预混液同时再给予氯喹灌胃;空白组和模型组以等量的无菌水灌胃。模型复制成功后进行灌胃,每天1次,连续28天。3.指标观测:通过HE、Masson染色观察小鼠肺组织病理改变;肺组织羟脯氨酸检测肺组织胶原含量;通过Q-PCR检测致纤维化相关因子TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅲm RNA相对表达水平;通过电镜观察电镜下自噬小体数量;通过Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达水平以及PI3K/AKT/m TOR信号通路p-PI3K、p-AKT、p-m TOR蛋白的表达水平。结果:1.姜黄素、莪术醇、三七总皂苷缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化1.1肺组织病理切片结果模型组可见肺泡间隔明显增厚,部分可见肺泡壁断裂,肺泡融合,且可见炎细胞浸润,肺血管壁,支气管壁周围可见束状或片状胶原纤维沉积,肺泡间隔可见明显胶原纤维沉积;益散组分干预组可见肺泡间隔增厚,肺泡壁断裂、融合情况有所改善,气管、血管以及肺间质胶原纤维沉积情况明显减轻。1.2胶原蛋白检测结果模型组小鼠肺组织中羟脯胺酸含量、Collagen-Ⅲm RNA相对表达升高,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,给药28天后,益散组分干预组小鼠肺组织中羟脯胺酸、Collagen-Ⅲm RNA相对表达与模型组比较有所下降,差异具有统计学意义(P0.05)。1.3致纤维化相关因子TGF-β1、α-SMAm RNA相对表达水平模型组小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMAm RNA相对表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,益散组分干预组小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMAm RNA相对表达有所下降,差异具有统计学意义(P0.05);与抑制剂组相比,益散组分干预组小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMAm RNA相对表达有所下降,差异具有统计学意义(P0.05)。2.姜黄素、莪术醇、三七总皂苷增强肺组织细胞自噬水平2.1电镜观察自噬小体结果模型组小鼠肺组织中自噬小体数量明显减少;与模型组比较,益散组分干预组小鼠肺组织中自噬小体数量显著增多。2.2自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1的表达模型组小鼠肺组织中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin1表达较空白组明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,益散组分干预组小鼠肺组织中LC3B-Ⅱ、Beclin1表达有所升高,差异具有统计学意义(P0.05);3.氯喹抑制自噬后致纤维化相关因子表达上升抑制自噬后,与益散组分干预组比较,益肺散结方部分组分+抑制剂组可见炎性浸润明显增加,肺泡间隔增宽,部分可见肺泡壁断裂及肺泡融合,气管和肺间质周围胶原纤维沉积明显增加;益肺散结方部分组分+抑制剂组小鼠肺组织中羟脯胺酸、Collagen-3m RNA相对表达升高,差异具有统计学意义(P0.05);益肺散结方部分组分+抑制剂组小鼠肺组织中TGF-β1、α-SMAm RNA相对表达升高,差异具有统计学意义(P0.05)。4.姜黄素、莪术醇、三七总皂苷抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路调控自噬水平模型组小鼠肺组织中p-PI3K、p-AKT、p-m TOR蛋白表达较空白组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,益散组分干预组小鼠肺组织中p-PI3K、p-AKT、p-m TOR蛋白表达有所降低,差异具有统计学意义(P0.05);同时益散组分干预组小鼠肺组织中自噬小体数量显著增多,LC3B-Ⅱ、Beclin1蛋白表达的影响含量有所上升,差异具有统计学意义(P0.05);结论:1.益肺散结方部分组分莪术醇、姜黄素、三七总皂苷下调致纤维化相关因子TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅲ的表达,降低了细胞外基质以及胶原纤维沉积,缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。2.益肺散结方部分组分莪术醇、姜黄素、三七总皂苷促进自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin1的表达,抑制了PI3K/AKT/m TOR信号通路,可能是缓解肺纤维化的重要信号转导机制之一。
【学位授予单位】：云南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5

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本文编号：2707801