【摘要】：目的:本课题基于芪明颗粒良好的视网膜保护效应,通过建立放射性视网膜病变(Radiation Retinopathy,RR)大鼠模型,探讨芪明颗粒对RR模型动物内质网应激相关蛋白及HIF1α-VEGF信号通路干预的机制研究,为中医药防治RR以及类似疾病提供一定的研究思路。方法:采用直线加速器放射大鼠眼部,建立RR大鼠模型。除正常对照组25只大鼠外,其余125只大鼠接受放射,单次剂量10Gy,每周放射1次,连续3周,合计剂量30Gy。随机分6组为:正常组,模型组,阳性药Salubrunal对照组(sal组),中药高、中、低剂量组,每组25只。放射3月后开始连续灌胃。用药1、3、6月后,HE染色观察治疗后视网膜组织形态学改变;免疫组织化学染色法检测视网膜CHOP、HIF1α、VEGF表达情况。结果:(1)造模后,HE染色观察显示模型组视网膜各层结构松散,模型组神经节细胞层排列紊乱伴水肿,各层细胞均减少,以内核层及外核层为主。视网膜消化铺片示模型组低倍镜下毛细血管排列紊乱,扭曲,高倍镜下血管管径粗细不均,与正常组相比较,内皮细胞及周细胞数量减少,细胞变形。免疫组织化学染色检测示模型组VEGF平均光密度升高,差异有显著统计学意义(P0.01)。提示造模成功。(2)用药后(1)HE染色观察显示,用药1月后芪明颗粒中剂量组及sal组细胞各层层数及形态较完整,节细胞层排列整齐致密,未见明显水肿及空泡形成。用药至3、6月,芪明颗粒中剂量组节细胞层明显整齐,内核层、外核层形态完整,未见水肿、血管增生及纤维增值膜等改变,sal及中药高、低剂量组内界膜及视网膜纤维层细胞略增生。提示芪明颗粒可减轻RR视网膜水肿,改善组织细胞凋亡,一定程度上抑制新生血管的形成,从而保护视网膜形态学的改变。(2)CHOP免疫组织化学检测示:用药1月后,模型组大鼠视网膜CHOP蛋白表达增加,与正常组差异有显著统计学意义(P0.01),且随着用药时间延长,表达在逐渐增加;与模型组相比较,sal组及中药中剂量组在用药1月后表达减少,差异有显著统计学意义(P0.01),且随着时间延长,表达量在不断减少往正常靠近,中药低、高剂量组在用药1月后蛋白表达减少,但无统计学意义(P0.05),随着时间延长,蛋白表达减少差异具有显著统计学意义(P0.01)。提示早期RR可出现CHOP蛋白表达增加,并随着时间延长,表达在不断增加,中药及salubrinal可降低内质网应激相关蛋白CHOP表达,并随着时间延长,效果越明显。(3)HIF-1α免疫组织化学检测示:用药1月后,模型组大鼠视网膜HIF1α蛋白表达增加,与正常组相比较有显著统计学意义(P0.01),且随着用药时间延长,表达在增加;与模型组相比较,sal组、中药低、中、高剂量组表达均减少,且差异有显著统计学意义(P0.01),但中药中剂量组较sal组降低,且差异有统计学意义(P0.05),随着用药时间延长至3、6月,中药中剂量组表达量不断减少,且较sal差异仍有统计学意义(P0.05)。(4)VEGF免疫组织化学检测示:用药1月后,模型组大鼠视网膜VEGF蛋白表达增加,与正常组相比较有显著统计学意义(P0.01),且随着用药时间延长,表达在不断增加;与模型组相比较,sal组、中药低、中、高剂量组表达均减少,差异具有显著统计学意义(P0.01);与sal组相比较中药中、高剂量组均增加,差异无统计学意义(P0.05),随着用药时间延长至3、6月,中药中剂量组较sal组表达减少,差异无统计学意义(P0.05)。提示salubrinal和芪明颗粒均可在早期干预早期放射性视网膜病变HIF-1α-VEGF信号通路,降低HIF-1α、VEGF表达并随着用药时间延长,表达越为减少。结论:芪明颗粒干预早期RR视网膜损伤,减轻视网膜组织水肿,一定程度上抑制血管增生,并对视网膜组织细胞放射损伤产生一定程度保护效应。其作用机制可能是通过干预内置网应激相关CHOP蛋白表达,降低HIF-1α表达,抑制视网膜VEGF表达,进而改善视网膜组织缺血缺氧及血管新生。
【图文】：
.4.2 RR 大鼠视网膜组织形态学观察HE 染色显示正常组大鼠视网膜结构较清楚，，节细胞单层排列，大鼠视网膜节细胞层细胞排列紊乱伴水肿，各层细胞数量均减为主（见图 1.1,1.2 黑色箭头所示）。
.4.2 RR 大鼠视网膜组织形态学观察HE 染色显示正常组大鼠视网膜结构较清楚，节细胞单层排列，大鼠视网膜节细胞层细胞排列紊乱伴水肿，各层细胞数量均减为主（见图 1.1,1.2 黑色箭头所示）。
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5
【参考文献】
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2709352
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