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药物木尼孜其对慢性应激型卵巢早衰大鼠PFN1及CFL1表达的影响

发布时间:2020-06-13 05:07
【摘要】:目的:本课题构建慢性应激型卵巢早衰大鼠模型并用药物木尼孜其进行治疗,对前期工作中基于iTRAQ结合LC/MS/MS技术筛查出来的慢性应激型卵巢早衰大鼠的部分差异性蛋白质在卵巢组织中的表达水平进行验证,为探讨慢性应激型卵巢早衰大鼠的发病机制提供有意义的实验数据。方法:随机选取90只有正常性周期的SD大鼠并从中随机选取10只设为正常组(N组),剩下的80只大鼠设为慢性应激型造模组(CS组),在湿寒且昼夜颠倒的环境下饲养,定期观察各组大鼠的一般情况(毛发顺滑度度、运动、敏捷、体重量、饮水量、食物摄入量等)以及每只大鼠发情周期的变化,通过观察一般情况、大鼠发情周期及定性指标(激素FSH、E2、LH水平)来确认慢性应激模型成立,确认后从慢性应激型造模组中筛选出成为卵巢早衰的大鼠,分为卵巢早衰组(POF组)、卵巢早衰药物治疗低剂量组(PDL组)、卵巢早衰药物治疗中剂量组(PDM组)、卵巢早衰药物治疗高剂量组(PDH组)(1)采用ELISA法检测外周血清中β-EP、FSH、E2、LH的含量;(2)卵巢组织形态学变化:观察卵巢组织中卵泡的病理学改变;(3)采用ELISA法检测所筛选出来的的差异表达的蛋白PFN1和CFL1在各组大鼠血清中的含量;用免疫组织化学方法检测所筛选的差异表达蛋白PFN1和CFL1在卵巢中的表达;用RT-PCR法检测PFN1和CFL1的mRNA在卵巢的表达量。结果(1)一般情况观测:造模期间,慢性应激组的大鼠皮毛变的粗糙、失去光泽、活动量明显减少、反应不迅速,并且观察到疲倦。大鼠的体重及饮水量增加量明显低于正常组大鼠;食物摄入量的增加量明显高于正常组大鼠(P0.05);在药物治疗期间大鼠的一般情况及动情周期紊乱的情况得到有效改善。(2)卵巢早衰组(POF组)大鼠的外周血清中E2含量相比于正常组明显下降(P0.05),FSH和LH含量相比于正常组明显上升(P0.05),随着药物剂量的升高对各组大鼠血清中激素的含量调节作用也随之增强。卵巢早衰组的大鼠血清中β-EP含量相比于正常组的大鼠明显下降(P0.05),且卵巢早衰药物治疗高剂量组能够明显升高血清中β-EP的含量(P0.05)。(3)卵巢组织形态学变化:卵巢早衰组(POF组)大鼠未见明显有腔卵泡、空泡样变化多及水肿严重,随着药物剂量的增加,改善情况也随之上升,其中高剂量药物治疗组的改善效果最佳。(4)免疫组织化学结果显示差异性PFN1蛋白在卵巢细胞质中的表达量较在卵巢细胞核中表达增多,而在间质以及在黄体中低表达或低表达,PFN1蛋白在卵巢早衰组(POF组)大鼠表达量较正常对照组(N组)表达显著上升(P0.05),各药物治疗组能够降低其表达;CFL1蛋白在大鼠卵巢细胞质中表达量较在卵巢细胞核中表达增多,间质以及在黄体中不表达或低表达,CFL1蛋白在卵巢早衰组(POF组)大鼠表达量较N组表达显著上升(P0.05),各药物治疗组能够降低其表达。(5)实时荧光定量RT-PCR结果显示:卵巢早衰组(POF组)与正常对照组(N组)比较发现,PFN1和CFL1的mRNA的表达水平均上升(P0.05),其中各药物治疗组中高剂量药物治疗组能显著下调PFN1和CFL1的mRNA表达水平(P0.05)。结论:慢性应激能够导致卵巢早衰的发生;卵巢的组织病理学改变以及出现的激素紊乱(E2、FSH、LH)可能是其发病的重要机制之一;木尼孜其能够改善卵巢早衰病变,其药理作用机制可能与调整紊乱的激素水平(E2、FSH、LH)及下调相关蛋白PFN1、CFL1的表达作用有关。
【图文】:

发情周期,大鼠,慢性应激,大鼠模型


注:a:发情前期;b:发情期;c:发情后期;d:发情间期图 1 大鼠发情周期的变化( 100)Figure 1 Changes of estrus cycle of rats ( 100)2 慢性应激型 POF 大鼠模型的复制2.1 造模期间 般情况的变化

药物治疗,卵巢早衰,低剂量


注:正常组(N 组); 卵巢早衰组(POF 组);高剂量药物治疗组(PDH 组);中剂量药物治疗组(PDM 组);低剂量药物治疗组(PDL 组)图 12 CFL1 在各组大鼠卵巢组织中的表达(×200)Figure 12 Expression of CFL1 in ovarian tissue of rats in each group(×200)
【学位授予单位】:新疆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R285.5

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本文编号:2710701

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