安石榴苷对乳头状甲状腺癌BCPAP细胞的抑制作用及机理研究

发布时间：2020-06-17 22:50

【摘要】：甲状腺癌属于内分泌恶性肿瘤,近几年的发病率不断上升,其中乳头状甲状腺癌的发病率最高。尽管有多种手段治疗甲状腺癌,但仍存在复发、转移、恶化等风险,有些治疗还会带来副作用。多酚类物质具有一定的抗肿瘤活性,并且作为天然化合物的代表具有来源广、毒性低、作用靶点多样等优势。石榴中提取的安石榴苷属于多酚中的大分子物质,其抗肿瘤功效已经引起科学家的关注。然而安石榴苷在甲状腺癌中的作用机制尚未明晰。本论文主要探究安石榴苷对乳头状甲状腺癌BCPAP细胞的抑制作用和相关机理,为安石榴苷在甲状腺癌治疗方面的应用提供科学依据,同时探索新的治疗靶点。本课题首先探讨安石榴苷对BCPAP细胞的毒性作用。SRB和MTT检测结果显示安石榴苷以剂量依赖和时间依赖方式抑制BCPAP细胞存活,并且与正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,安石榴苷对BCPAP细胞的抑制效应更显著。台盼蓝以及PI染色结果显示,安石榴苷破坏了BCPAP细胞膜的完整性,且具有浓度依赖性。在此基础上,我们探讨安石榴苷诱导BCPAP细胞死亡的途径。PI/Hoechst 33342双染以及western blot检测结果显示安石榴苷未引起细胞凋亡。AO染色以及自噬相关蛋白的检测结果显示安石榴苷诱导了细胞自噬。联用安石榴苷与自噬抑制剂3-MA、Baf A1后,我们发现安石榴苷促进了细胞内自噬流。MTT结果显示3-MA显著地逆转了安石榴苷诱导的细胞死亡效应。Western blot检测结果进一步说明安石榴苷可能通过正调控ERK与p38通路和负调控mTOR通路来诱导自噬,进而促进BCPAP细胞死亡。第三部分探讨安石榴苷对BCPAP细胞DNA损伤的影响及相关机制。结果显示安石榴苷促进DNA损伤标志物H2A.X的磷酸化,引起细胞DNA断裂,但不引起DNA构象改变,而且对DNA损伤的诱导不依赖活性氧簇的产生。安石榴苷还促进DNA损伤应答相关蛋白ATM的磷酸化,然而对ATR的磷酸化无明显影响。ATM抑制剂KU-55933能逆转安石榴苷对BCPAP细胞存活率的抑制作用,说明ATM参与介导安石榴苷诱导的BCPAP细胞死亡。最后部分探究安石榴苷对BCPAP细胞衰老的影响及相关机制。细胞粒径测定及粒度分析、β-半乳糖苷酶活性检测、细胞周期及相关蛋白水平检测等结果表明,安石榴苷可诱导细胞衰老,且具有剂量依赖效应。通过分析衰老相关分泌表型IL-8,IL-6,IL-1β的mRNA水平,我们发现安石榴苷无法诱导IL-8表达,但可明显上调IL-6和IL-1β的表达水平,且具有浓度依赖性。此外,安石榴苷无法诱导内质网应激(以毒胡萝卜素为阳性对照药物)。进一步的研究显示安石榴苷激活了NF-κB通路,并通过该通路正调控IL-6和IL-1β的表达。NF-κB还参与介导安石榴苷诱导的BCPAP细胞衰老和死亡。综上所述,本研究证明了安石榴苷通过诱导细胞发生自噬性死亡以及DNA损伤和细胞衰老来抑制乳头状甲状腺癌BCPAP细胞的生长存活,其中涉及到MAPK,mTOR,ATM,NF-κB等通路。安石榴苷有望成为治疗甲状腺癌的新兴药物。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：

化学结构,鞣花酸,石榴皮,鞣花单宁

它的化学分子式为 C48H28O30，相对分子质量达到9]。安石榴苷具有多个亲水性羟基，因而有着良好的水溶解性，可被水解为石榴皮鞣素和鞣花酸，石榴皮鞣素又进没食子酸[11]。安石榴苷还可溶于甲醇等有机溶剂[12]。在酸下，安石榴苷的稳定性较差，易降解为鞣花酸等物质[13]。包括安石榴苷在内的鞣花单宁类物质既可被直接吸收至过肠道微生物的生物转化作用变为活性代谢物而被间接的皮中所含安石榴苷的量不尽相同，范围在 39.8 ~121.5 m mg/g[15]。安石榴苷目前仅能通过天然提取的方式获得。

镜像,抑制效应,细胞的,标尺

3 结果与讨论榴苷对乳头状甲状腺癌BCPAP细胞的毒性研究榴苷对甲状腺癌 BCPAP 细胞的抑制作用定安石榴苷对 BCPAP 细胞的抑制作用，我们用不同浓度安石榴）刺激 BCPAP 细胞 24 h（另设 SC 对照）后，先镜像观察，从细析其存活情况。图 3-1 显示，与 SC 相比，随着安石榴苷作用浓显减少，说明细胞的生长受到抑制，高浓度组（50，100 μmol/L

【参考文献】