白藜芦醇通过上调Bmi1改善油酸诱导的L02细胞肝脏脂肪毒性

发布时间：2020-06-17 23:05

【摘要】：研究目标:非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精外,由其他明确的损肝因素所致的,以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征。它是很多慢性重型肝脏疾病,如肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的重要原因之一。NAFLD与活性氧(ROS)自由基产生和氧化还原平衡的破坏相关。Bmi1蛋白是聚刷蛋白抑制复合物1(polycomb repressor complex 1,PRC1)的组分之一,其主要功能是在组织发育和细胞分化、增殖中调控发育和增殖相关基因表达。Bmi1蛋白在介导ROS的生成、线粒体的功能与DNA损伤修复(DNA damage repair,DDR)中扮演重要作用。研究显示天然植物性抗氧化剂,白藜芦醇可以保护肝组织免受氧化应激和肝线粒体功能障碍的损伤。本研究中,我们通过油酸诱导的L02细胞NAFLD模型,以及向L02细胞中转染过表达和降低Bmi1的质粒的方法,采用Western blot、qRT-PCR和免疫荧光技术,评价白藜芦醇是否是通过上调氧化相关蛋白Bmi1的表达,降低ROS从而起到缓解油酸诱导的脂毒性作用。研究方法:本研究首先查看研究所给予的白藜芦醇剂量是否可以缓解油酸诱导的L02细胞脂肪积累、代谢损伤和凋亡毒性作用。然后查看实验中的白藜芦醇是否可以降低油酸诱导的L02细胞氧化应激能力,以及改善DNA损伤。再用Western blot和qRT-PCR的方法确定目标分子Bmi1是否是白藜芦醇的作用靶点。最后,在L02细胞中过表达和降低Bmi1的表达水平,查看油酸对L02细胞的脂毒性作用,从而证明给予白藜芦醇起着和上调Bmi1一样的保护作用。研究结果:白藜芦醇改善了油酸诱导的L02细胞脂毒性作用,并且白藜芦醇降低了油酸诱导的L02细胞积累的ROS水平;同时,油酸诱导的L02细胞中,Bmi1蛋白表达降低且其下游通路蛋白INK4A/ARF上调,而白藜芦醇上调了Bmi1蛋白却降低INK4A/ARF。此外,向L02细胞中转染Bmi1 siRNA后,细胞更容易造成脂毒性;而向L02细胞中转染过表达Bmi1质粒,可以拮抗油酸诱导的脂毒性损伤。这些发现不仅阐明了白藜芦醇作为抗氧化剂缓解NAFLD发生发展的分子机制,也为开发白藜芦醇作为防治NAFLD的药物提供了理论支持。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
【图文】：

油酸,白藜芦醇,凋亡,蛋白表达

华中科技大学硕士学位论文降（图 1.C）。油酸处理后，L02 细胞中促进凋亡蛋白 cleaved caspase3 和 Bax 蛋白表达显著上升，抑制凋亡蛋白 Bcl2 蛋白表达显著下降，而油酸与白藜芦醇联合给药时，凋亡相关基因表达情况都被逆转（图 1.D）。这所有的结果都显示，白藜芦醇改善了油酸诱导的 L02 细胞凋亡。

白藜芦醇,油酸,脂滴

华中科技大学硕士学位论文（0.8 mM）或联合白藜芦醇（50 uM）培养 24 h 后，Western blot 显示凋亡相关蛋白的表达水平。3.2 白藜芦醇改善了油酸诱导的 L02 细胞脂滴积累Joseph A. Baur 在 2006 年首次报道白藜芦醇降低了肥胖小鼠的脂滴积累，随后大量的研究证实了白藜芦醇能改善肝脏脂肪化，因而我们应用油酸模型验证白藜芦醇对脂滴形成的作用。我们发现，用 0.8 mM 油酸处理 L02 细胞 24 h 后，油红 O 染色结果显示，细胞脂滴积累明显增多（图 2.A）。而当将白藜芦醇和油酸联合给药时，因油酸而积累的脂滴数量明显降低（图 2.A）。同时，我们应用TG 定量试剂盒检测了细胞内的脂滴浓度，发现油酸处理组 TG 浓度显著升高，而白藜芦醇和油酸联合组 TG 浓度较油酸处理组显著降低（图 2.B）。**: p < 0.01表示组间有显著性差异。

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