金线莲苷对ANIT致肝内胆汁淤积型肝损伤的保护作用及其在犬体内的药代动力学研究

发布时间：2020-06-18 04:25

【摘要】：目的:(1)研究金线莲苷对ANIT致肝内胆汁淤积型肝损伤的保护作用;(2)考察金线莲苷在比格犬体内的药代动力学特征及生物利用度,为其成药性研究提供数据支持。方法:(1)构建ANIT致大鼠肝内胆汁淤积型肝损伤模型,通过灌胃给药的方式连续给予不同剂量的金线莲苷,考察灌胃给予金线莲苷后血浆生化指标、肝脏组织病理及生物基质中胆汁酸的浓度变化,在整体动物水平评价金线莲苷对胆汁淤积型肝损伤的保护作用。并通过实时荧光定量PCR和免疫印迹的方法测定动物实验收集肝脏样本中核受体、胆汁酸转运体、代谢酶的基因和蛋白表达水平,以研究金线莲苷对胆汁淤积型肝损伤发挥保护作用的潜在机制。(2)通过系统地评价金线莲苷在比格犬全血和血浆中的稳定性,本文建立一种快速、灵敏的犬血浆中金线莲苷的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并系统地评价金线莲苷在比格犬全血和血浆中的稳定性。将经过完整方法学验证的检测方法应用于金线莲苷在比格犬体内的药代动力学研究,并考察金线莲苷在比格犬体内的生物利用度。结果:(1)金线莲苷可以显著降低胆汁淤积大鼠血浆生化指标、改善肝脏病理生理情况,并降低血浆中浓度显著性升高的胆汁酸浓度;金线莲苷通过激动FXR上调胆汁酸外排转运体的表达,从而促进胆汁酸外排并缓解肝内胆汁淤积,且对大鼠肝内胆汁淤积型肝损伤的保护作用呈现剂量依赖性。(2)通过体外稳定性实验,确定金线莲苷在生物基质中的不稳性主要是由于其容易水解导致的,并采用严格控制温度和样品处理时间的方式解决金线莲苷在犬基质中的稳定性问题;通过体内药代动力学实验,首次揭示金线莲苷在比格犬体内的生物利用度,金线莲苷在犬体内低、中、高剂量的生物利用度均为30%左右,生物利用度较高。结论:金线莲苷对ANIT诱导的肝内胆汁淤积型肝损伤具有保护作用,其犬体内的药代动力学研究结果也表明灌胃给药后吸收迅速、生物利用度较高,具有良好的新药研发前景。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

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图 1.1 动物实验流程图物样本的采集重大鼠并记录体重后，用 25%乌拉坦麻醉大鼠，剪开麻醉大鼠腹腔离胆管，并使用 PE-50 软管对大鼠胆管进行插管，待观测到胆汁流象后，用预先称重好的 2mLEP 管接取胆汁，1h 后结束胆汁收集，有大鼠胆汁的 EP 管重量，并将收集的血浆置于冰上保存。随后，行心脏穿刺取血至含抗凝剂肝素钠的1.5mLEP管中，冰上放置30mpm 离心 10min，收集血浆并分装后，将收集的血浆和胆汁立即保存后，使用预热 37 ℃的生理盐水从肝门静脉对大鼠进行心脏灌流，净且大鼠肝脏变为土黄色后，收集大鼠肝脏并称重。将大鼠肝脏随一份保存在 4%多聚甲醛中用于病理生理考察，剩余 5 份迅速放于完成对所有实验动物的样品采集后，将于液氮中冻存的所有样本

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图 1.4 金线莲苷对 ANIT 致胆汁淤积大鼠肝脏病理生理的影响。A，正常大鼠；B，ANIT模型大鼠；C，ANIT 模型下灌胃给予低剂量金线莲苷（50mg/kg）大鼠；D，ANIT 模型下灌胃给予中剂量金线莲苷（100mg/kg）大鼠；E，ANIT 模型下灌胃给予高剂量金线莲苷（200mg/kg）大鼠；F，ANIT 模型下灌胃给予 UDCA（80mg/kg）治疗大鼠；G，正常大鼠灌胃给予 100mg/kg 金线莲苷。3.4 金线莲苷对 ANIT 致胆汁淤积大鼠血浆胆汁酸稳态的影响金线莲苷对 ANIT 致胆汁淤积大鼠血浆胆汁酸稳态的影响如图 1.5 所示。大鼠灌胃给予 75mg/kgANIT 后，血浆中 DCA、LCA、TCA、T-α-MCA、T-β-MCA、TCDCA、TDCA、TUDCA、TLCA 和 GCA 显著性升高，但 CDCA、UDCA 和GUDCA 显著性下降。灌胃给予不同剂量金线莲苷可以显著降低胆汁淤积大鼠血浆中浓度升高的 LCA、TCA、T-α-MCA、T-β-MCA、TCDCA 和 TLCA，但可升高血浆中 CA 和 CDCA 浓度水平。值得注意的是，正常大鼠给予 100mg/kg 金线

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