西南地区胡蜂毒的物质类别定性定量分析及主成分分离纯化

发布时间：2020-06-18 12:01

【摘要】：目的采用化学显色法、SDS-PAGE特征图谱和分光光度法等技术对采自西南地区胡蜂的蜂毒所含各类物质成分进行鉴别研究和含量测定研究,为分离纯化得到的分子结构鉴定提供参考;采用HPLC分离纯化胡蜂毒中6个色谱纯组分,并利用质谱、核磁共振光谱、蛋白多肽N端测序和C端测序等技术手段对各组分的结构进行解析。方法采用了茚三酮试验、蛋白黄反应试验和双缩脲反应试验来鉴别胡蜂毒中的氨基酸和多肽蛋白类成分;α-萘酚试验、斐林试验、多糖试验来鉴别本品中糖或苷类成分;采用碘化铋钾试验、碘化汞钾试验、碘-碘化钾试验、硅钨酸试验等鉴别本品中生物碱类成分,碱性β-萘酚等试剂来鉴别本品中的芳胺类成分;利用SDS-PAGE特征图谱检测同一产地不同批次的胡蜂毒的分子量分布;初步研究胡蜂毒的大类化学成分,并进行了相关含量研究:采用BCA法、福林酚法、考马斯亮蓝法测定胡蜂毒中多肽蛋白类物质含量;茚三酮法测定本品中游离氨基酸含量;苯酚-硫酸法测定胡蜂毒中的多糖含量;采用制备HPLC技术分离纯化了胡蜂毒的主要成分,并利用现代波谱技术和测序技术完成了各主成分的结构表征。结果蛋白黄鉴别试验、茚三酮和双缩脲的鉴别试验结果表明本品中可能含有氨基酸和多肽蛋白类物质;α-萘酚鉴别试验、斐林鉴别试验和多糖鉴别试验结果表明本品中可能含有多糖类物质,不含有还原糖和苷类物质;生物碱的鉴别试验证明了本品中可能含有生物碱类成分,芳胺类物质的鉴别试验则显示了本品中可能含有芳仲胺类成分;以上对本品中大类成分的鉴别研究对进一步的物质基础研究提供了有力支持。对总多肽蛋白、游离氨基酸和多糖含量测定的研究结果表明,本品中含有丰富的蛋白多肽类物质以及游离氨基酸和多糖类成分。利用制备HPLC技术对胡蜂毒进行了分离纯化,开发了能实现大量富集本品主要成分的分离纯化技术,得到了大量的A～F等6个主要成分,经系统的纯度检查样品纯度达到了 98%以上。并利用现代质谱、核磁共振光谱以及蛋白多肽N端和C端测序技术完成了主成分的结构鉴定工作,得到了2个胺类和生物碱类成分、3个生物活性小肽和1个生物活性蛋白家族亚型。结论本课题经过对西南地区胡蜂毒的大类化学成分鉴别研究和含量测定研究以及主要成分的大量分离纯化和结构鉴定工作,补充了对该种胡蜂蜂毒的物质基础研究内容,为今后本品的药用开发及药效机理研究等奠定了基础。
【学位授予单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R284
【图文】：

胡蜂,茚三酮

３．１胡蜂毒中总肽蛋白类物质和氨基酸的鉴别实验逡逑３．１．１蛋白黄鉴别反应逡逑如图１－１所示，实验中加入硝酸后，对照品溶液呈黄色，供试品溶液呈乳黄逡逑色；如图１－２所示，当加入氧氧化钠后，对照品和供试品溶液均呈现橙黄色，表逡逑明胡蜂毒可能含有蛋白质类成分。此鉴别方法专属性高，重复性好。逡逑｜—逦ｉ邋：邋Ｉ逡逑空白对照品批１邋批２邋批３逦空白对照品批１邋批２邋批３逡逑图１－１胡蜂毒的蛋白黄鉴别中间反应逦图１－２胡蜂毒的蛋白黄鉴别最终反应逡逑３．１．２茚三酮鉴别反应逡逑如图１－３所示，在实验中加入２邋％茚三酮乙醇溶液，加热后，供试品和对照逡逑品均显紫色，说明胡蜂毒可能含有游离氨基酸类成分，同时未显示黄色，提示胡逡逑蜂毒可能不含脯氨酸和羟脯氨酸成分。此方法针对检测供试品中的氨基酸及具有逡逑游离ｏｔ－氨基和（Ｘ－羧基的肽类组分，简单易行，显色明显，重复性好。逡逑＇１１邋１邋￡逡逑空白对照品批１邋批２邋批３逡逑图１－３胡蜂毒的茚三酮鉴别ｋ应逡逑１０逡逑

胡蜂,中间反应,蛋白

【参考文献】