基于益气活血法探讨竹节参干预脊髓缺血再灌注损伤后细胞凋亡相关蛋白的影响研究

发布时间：2020-06-19 22:35

【摘要】：目的基于益气活血法探讨竹节参干预脊髓缺血再灌注损伤(SCII)大鼠模型的防治效果。通过比较竹节参干预SCII后脊髓前角运动神经元组织形态的变化,并检测相应的凋亡蛋白,从而探讨益气活血法对SCII后的脊髓前角运动神经元的是否有保护作用。方法100只清洁级SD大鼠,雄雌不限,随机分为假手术组、模型组、竹节参低、中、高剂量组;适应性喂养7d后,对假手术组与模型组按每天2ml生理盐水灌胃,竹节参低、中、高剂量组分别采用浓度为1.33g/kg·d~(-1)、2.67g/kg·d~(-1)、5.33g/kg·d~(-1)灌胃干预;灌胃时间一共7d,然后造模,且于造模后6、24h采用改良Tarlov行为学评分评价竹节参对SCII的干预疗效;尼氏染色、HE染色法分别观察SCII后脊髓运动神经元细胞的数目、细胞形态的变化;ELISA检测血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的含量变化;免疫组织化学染色法检测相应脊髓运动神经元细胞中C-fos、C-jun、Bax蛋白的表达情况、免疫印迹法检测相应脊髓组织中C-fos、C-jun、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果1.改良Tarlov行为评分结果:在SCII6、24h后,假手术组评分均趋近于正常值(p0.05);在同一时间内,与模型组相比,中剂量组评分均高于模型组(p0.05);与中剂量组比较,低、高剂量组评分均低于中剂量组(p0.05)。2.HE染色结果:在SCII6、24h后,假手术组脊髓神经元细胞的形态完整,核仁、核膜清晰;模型组脊髓神经元细胞肿胀明显,呈空泡状,胞体固缩严重;竹节参低、中剂量组脊髓神经元细胞肿胀减小,核仁、核膜较清晰,但中剂量组优于低剂量组;3.NisslStaining结果:在SCII6、24h后,假手术组尼氏小体颗粒数目相对较多,模型组神经元细胞的形态不完整,且细胞间隙较大,数目突出性减少。竹节参低、中剂量组神经元细胞的形态有明显改善,尼氏小体颗粒数目明显增多,但中剂量组优于低剂量组。4.ELISA结果:在SCII6、24h后,假手术组趋于正常值;在同一时间内,与模型组相比较,竹节参剂量组均低于模型组(p0.05);与中剂量组相比,低、高剂量组均高于中剂量组(p0.05)。5.Immunohistochemistry结果:在SCII6、24h后,假手术组脊髓运动神经元细胞中C-fos、C-jun、Bax的表达基本相同(p0.05);在同一时间内,与模型组相比,竹节参低、中剂量组C-fos、C-jun、Bax的表达均下调(p0.05),而高剂量组C-fos、C-jun、Bax的表达无显著下调(p0.05);与低剂量组相比,中剂量组C-fos、C-jun、Bax的表达均显著下调(p0.05);6.WesternBlotting结果:在SCII6、24h后,假手术组脊髓神经元中C-fos、C-jun、Bax、Bcl-2的表达基本相同(p0.05);在同一时间内,与模型组相比,竹节参中剂量组C-fos、C-jun、Bax的表达均明显下调,Bcl-2的表达均上调(P0.05);结论1.益气活血法干预SCII可减轻脊髓神经元细胞的受损程度。2.竹节参可能通过抑制SCII后脊髓组织中C-fos、C-jun、Bax蛋白的表达水平,同时促进Bcl-2蛋白的表达水平,从而减少脊髓神经细胞的过度凋亡。3.基于益气活血法探讨竹节参干预SCII后脊髓神经元的保护作用有可能是通过抑制细胞过度凋亡作用而达到的。
【学位授予单位】：湖北民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

大鼠脊髓缺血再灌注损伤造模实验及损伤后T2-5阶段定位

3 实验结果通过尼氏染色法观察 SCII 后脊髓运动神经元细胞形态的变化。结果显示，假手术脊髓神经元细胞中尼氏小体颗粒数目相对较多，且均称地散布于细胞质中，其着色为深紫色，神经元细胞的形态良好（见图 2-2A、2-3A）；在 SCII 6 、24 h 后，与假手术组对比，模型组脊髓神经元细胞的形态表现为均不完整，且细胞间隙较大，神经元胞体皱缩较重，色泽较浅，神经元细胞的数目突出性减少（见图 2-2B、2-3B）；与模型组对比，竹节参低、中剂量组神经元细胞破裂相对较少，着色较深，神经元细胞的形态有明显改善，神经元细胞数目明显增多，二者相比中剂量组神经元细胞的病理学改善较明显（见图 2-2C/D、2-3C/D）；与模型组相比，高剂量组神经元细胞的病理学无明显改善（见图 2-2E、2-3E）。（见图 2-2、2-3）

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本文编号：2721430