锁阳水提取物对少、弱精子症大鼠模型的精子活动参数和血清睾酮的影响及促进未分化精原细胞增殖、相关基因表达的实验研究

发布时间：2020-06-20 00:31

【摘要】：目的:近年来,男性不育症患者发病率逐年递增,但是其发病原因及分子机制仍然不明,目前尚缺少特异性的有效改善精子活力的药物。中药锁阳属于锁阳科,取锁阳的肉质茎水提取物为药,药性温和,其药理作用有补肾、壮阳、润肠、通便的作用,主要治疗肾脏阳气不足、精血亏损、阳痿少精等。本研究的目的是探讨锁阳水提取物对精子发生及精子活力、血清睾酮水平的影响及促进未分化精原细胞增殖、相关基因的表达,为传统医学新药的研制提供可能的理论与实验基础。方法:1、将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为4组(n=20),分别是正常组(Control)、模型组(Model)、锁阳水提取物组(CS)、左卡尼汀口服溶液组(L-carnitine)。采用环磷酰胺构建大鼠少、弱精子症模型,分别给予模型大鼠锁阳水提物、左卡尼汀口服溶液连续灌胃4周。2、观察以下指标:(1)锁阳水提物对大鼠睾丸组织重量的影响;(2)苏木素伊红(HE)染色观察大鼠睾丸组织中生精细胞的分布情况;(3)计算机辅助精液分析法(CASA)检测大鼠附睾尾部精子数目及活力;(4)采用染色质扩散法(SCD)检查附睾尾部精子DNA碎片化指数(DFI);(5)采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定大鼠血清中卵泡刺激素(FSH)及睾酮(T)水平;(6)采用酶联免疫吸附法(ELISA)方法检查附睾尾部精子中脂质过氧化产物(LPO)及活性氧(ROS)的水平;(7)采用流式细胞仪(FACS)检测CS灌胃治疗后精原干细胞(SSC)S期细胞比例;(8)采用末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法(Tunel)染色的方法检测大鼠精原干细胞的凋亡情况;(9)采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)的方法检测大鼠睾丸组织中精原细胞表面标志物Thy1、GFRα1、PLZF以及C-kit基因mRNA表达。结果:(1)Control组,Model组,CS组以及L-carnitine组睾丸组织重量分别为:1.7±0.058g,1.335±0.02g,1.55±0.015g,1.587±0.056g,CS 组大鼠睾丸组织重量较 Model组有所增加,差异有统计学意义,而CS组与L-carnitine组间未见明显差异;(2)HE染色结果示CS组睾丸组织中部分生精小管层数较Model组增加,管腔中精子数增加,排列规则,呈簇样;(3)CASA结果示CS组附睾尾部精子数目较Model组增加(P0.05);(4)CASA结果显示四组精子活力分别为:66.57±4.76g%、41.40±5.73%、57.52±7.54%、59.52±12.06%,CS组附睾尾部精子活力较Model组增加,低于Control组;(5)CS组附睾尾部精子DFI较Model组减少(P0.05);ROS水平及LPO水平较 Model 组下降(P0.05);(6)CS组大鼠血清中FSH及T水平较Model组增加(P0.05);(7)GFRο1(+)精原细胞群经CS处理后,S期细胞比例较Model组增加,差异有统计学意义(P0.05);(8)各浓度CS组之间大鼠精原干细胞凋亡率无显著差异;(9)CS组大鼠睾丸组织中Thy1、GFRο、PLZF基因mRNA水平增加(P0.05),但C-kit基因表达无显著差异;(10)CS组睾丸组织中GDNF基因mRNA表达水平高于Model组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.环磷酰胺构建大鼠少弱精子症模型的作用机制与氧化过度和能量代谢障碍密切相关;2.锁阳水提取物可以显著改善环磷酰胺的损伤,其主要作用机制为:1)增加大鼠附睾尾部精子的数目以及活率;2)有助于降低血清中ROS水平,改善LPO水平,降低精子DNA碎片化指数(DFI),从而改善精子活力;3)升高血清睾酮浓度促进性成熟及促进精子发生过程;4)促进垂体FSH的分泌,继而促进精原干细胞增殖和睾丸组织中Thy1、GFRα、PLZF基因表达水平增加。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

铡砂ｊ＜３题敢对少、弱慵子症大鼠丨截酌＾＾恭＾＾卩血清睾圾促进未分二、结果逡逑睾丸组织重量变化逡逑膦酰胺造模大鼠锁阳水提物0．５ｇ／ｋｇ／ｄ灌胃治疗，持续４周后，４）、模型组（Ｍｏｄｅｌ）、锁阳水提物组（ＣＳ）、左卡尼汀组（Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ）为：１．７±０．０５８ｇ，邋１．３３５±０．０２ｇ，１．５５±０．０１５ｇ，邋１．５８７±０．０５６ｇ，重量较Ｍｏｄｅｌ组有所增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。Ｌ－ｃａ异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），结果表明锁阳的确有助于精子发生过Ｗｅｉｇｈｔ邋ｏｆ邋ｔｅｓｔｉｓ逡逑２0＂＾＝０．００１５逦媝

睾尾部精子数目较Ｍｏｄｅｌ组增加，差异有统计学意义（尸＜０．０５）；邋Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ组附睾逡逑尾部精子数目也较Ｍｏｄｅｌ组增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；邋ＣＳ组与Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ逡逑组之间无显著性差异，如［图３］所示。逡逑附睾尾部精子数目逡逑２５０－１逡逑２００－逦，邋＊逦，逡逑１５０－W逦’逦＾逡逑１００－邋＿陶曊逡逑５０■W 逦＿逦＾逡逑０逦＿ｔ－；Ｖ；ｖＭ＿——ｒ邋邋Ｉ邋丨川邋１丨丨１丨１逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逦Ｍｏｄｅｌ逦ＣＳ逦Ｌ－ｃａｒｎｉｔｉｎｅ逡逑图３：采用ＣＡＳＡ计数大鼠附睾尾部精子数目。ＣＳ组附睾尾部精子数目较Ｍｏｄｅｌ逡逑组增加，差异有统计学意义尸＜0．0５邋（＊），ＣＳ组与Ｌ－ｃａｍｉｔｉｎｅ组之间无显著性差异。逡逑２３逡逑

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本文编号：2721575