连钱草活性多糖结构及迷迭香酸的代谢研究

发布时间：2020-06-21 19:46

【摘要】：连钱草为唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr.的干燥地上部分,有利湿通淋,散瘀消肿和清热解毒等功效,临床上主要用于利小便、治疗膀胱结石、肾结石、输尿管结石、肾炎水肿、湿热黄疸、胆囊炎、胆石症、腮腺炎、烧伤等。研究表明清热解毒中药往往都具有抗补体活性,为了阐述连钱草清热解毒的药效物质,我们对连钱草的抗补体活性的进行了筛选,结果发现连钱草75%醇提物抗补体活性较弱,而其粗多糖具有较好的抗补体活性。为了明确连钱草抗补体的活性成分,就连钱草粗多糖进行了进一步的纯化,从中共分离出了2个有抗补体活性的均一多糖,分别为GLP-1和GLP-2。通过多种理化方法表征了两个均一多糖结构特性。GLP-1,棕褐色疏松状,其主要为2种单糖组成的杂多糖,单糖组成为阿拉伯糖和半乳糖,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩尔比为1:6.3。GLP-1的分子量为5.37 KDa,蛋白质含量为0.94%,糖含量为94.8%。甲基化的结果结合核磁共振波谱数据,表明GLP-1是主链为1,6连接的半乳糖以及少量的1,3,6-连接的半乳糖,支链连接为1-连接阿拉伯糖终端和1-连接半乳糖终端,原子力显微镜结果表明其空间结构较为疏松,卷曲程度较高。GLP-2与GLP-1的结构较为相似,浅黄色疏松状,GLP-2主要由阿拉伯糖和半乳糖两种单糖组成,其中阿拉伯糖和半乳糖的摩尔比为1:4.9。GLP-2的分子量为20.04 KDa,蛋白质含量为0.95%;糖含量为93.5%。甲基化的结果及核磁数据显示:主链主要为1,6-连接的半乳糖以及少量的1,4,6-连接的半乳糖,支链连接为1-连接的阿拉伯糖终端和1,4-连接的半乳糖。原子力显微镜结果表明GLP-2的空间结构卷曲度较低,具有较为密集的网状连接特性。抗补体活性研究结果表明,GLP-1和GLP-2都具有较强的抗补体活性,CH_(50)分别为0.028±0.011mg/mL,0.056±0.015 mg/mL,与阳性对照肝素钠(CH_(50)为0.041 mg/mL)相当,GLP-1较GLP-2的抗补体活性好,可能与其空间构象有关。补体系统与炎症的诱发有紧密联系,我们就两个均一多糖的抗炎活性进行了进一步的研究。巨噬细胞在炎症反应中有相当重要的作用,炎症反应会诱发炎症因子的产生。因此我们就脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞诱导炎症反应产生炎症因子,将NO释放抑制率作为评价指标,通过测定炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的释放量探讨其抗炎活性的作用机制,研究结果发现均一多糖对炎症细胞NO的释放量有明显抑制的作用,说明连钱草均一多糖GLP-1和GLP-2有明显的抗炎活性,且GLP-1的效果要比GLP-2的效果好。均一多糖GLP-1和GLP-2对炎症因子IL-6和TNF-α的释放有明显的抑制,但均一多糖对炎症因子IL-1β虽有抑制作用,但作用较弱,推测均一多糖GLP-1和GLP-2的抗炎活性作用机制可能主要是通过抑制炎症因子IL-6和TNF-α来发挥其抗炎活性。前期研究发现连钱草具有利尿通淋功效的主要活性成分是迷迭香酸,但目前迷迭香酸在大鼠体内的代谢研究报道较少。本实验采用超高效液相-四极飞行时间质谱(Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Quadrupole-time-of-flight Mass Spectrometry,UHPLC-QTOF-MS/MS)技术结合诊断离子策略快速鉴定连钱草的主含量和活性成分迷迭香酸在大鼠尿液、血浆、粪便、胆汁和五脏中(心,肝,脾,肺和肾)的代谢产物。利用空白基质扣减技术、基于预测代谢物质量亏损的筛选技术及诊断离子和中性丢失策略快速锁定并鉴定迷迭香酸的代谢产物,总共在血浆、尿液、胆汁和粪便中鉴定了16个代谢产物,发现迷迭香酸在大鼠体内主要发生甲基化、磺酸化和葡萄糖醛酸化等代谢反应,代谢产物主要经尿液和胆汁排出体外,主要分布在肾脏。通过迷迭香酸体内代谢研究进一步表明该化合物作用靶点在肾脏,为其利尿通淋功效提供了一定的科学依据。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

连钱草活性多糖结构及迷迭香酸的代谢研究草素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 luteolin-7-O-β-D-glucoside ethyl 刺槐素 AcacetinC-葡萄糖-8-C-葡萄糖芹菜素 6-C-glucose-8-C-glucose-apige菜素-7-O-葡萄糖醛酸乙酯苷 apigenin-7-O-β-D-glucuronide ethy-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖-芹菜素 6-C-arabinose-8-C-glucose-apige海常素 Clerodendrin芹菜素 Apigenin芦丁 Rutinum芫花素 Genkwanin

5 -蒎烯 -pinene6 胡薄荷酮 Pulelgone7 β-蒎烯 β-pinene8 对-聚伞花素 p-cymene9 -松油醇 -terpineol10 早熟素 Prococene11 薄荷醇 Mentholk12 异松樟酮 Isopinocamphone13 芳樟醇 Linalool14 1-8-桉叶素 1,8-cineole15 喇叭烯 Viridiflorene16 异薄荷酮 Isomenthone

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李贵花;;连钱草挥发油的最佳提取工艺研究[J];安徽农业科学;2011年32期

2 张雁萍;杨志刚;陈显国;裔新生;;三地野生连钱草引种栽培对比试验[J];种子;2010年07期

3 曾细生;用连钱草断指(肢)再植30例[J];中国中医药科技;2004年02期

4 马成亮;连钱草[J];特种经济动植物;2002年07期

5 马成亮;遍地清香连钱草[J];植物杂志;2002年03期

6 刘玉波;张海军;李广祥;张文彬;;优良的耐阴地被植物——长筒连钱草[J];园林;1998年02期

7 王修堂,田野;连钱草的药用价值与科学栽培[J];中草药;1995年10期

8 刘诗韵;;中草药防治鸡霍乱[J];中兽医医药杂志;1987年03期

9 杨林;连钱草致药物性皮炎一例[J];中药通报;1988年09期

10 吴德康;;金钱草的考证[J];南京中医学院学报;1989年02期

相关会议论文 前7条

1 杨念云;段金廒;李萍;钱士辉;张健;;连钱草黄酮类化学成分的研究[A];全国第六届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2004年

2 王庆;段金廒;钱大玮;钱士辉;朱玲英;;野生与栽培连钱草中熊果酸含量测定及质量评价[A];全国第六届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2004年

3 宋颖;戴艳青;肖玉秀;;脂质体平衡透析/HPLC/MS筛选连钱草药材中膜通透性成分[A];全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年

4 杨粹华;;金钱草、连钱草和广金钱草鉴别与运用[A];2005年全国中药研究暨中药房管理学术研讨会论文汇编[C];2005年

5 董玉秀;邓向涛;;连钱草中熊果酸与齐墩果酸测定方法研究[A];第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2009年

6 渠云博;蒋红云;张燕宁;张兰;何伟志;;连钱草萃取物对4种植物病原真菌抑菌活性的测定[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年

7 胡万春;郭宇;喻晓洁;;连钱草和金钱草利尿利胆活性筛选与比较试验研究[A];中华中医药学会中医药传承创新与发展研讨会专辑[C];2007年

相关重要报纸文章 前1条

1 傅伯祥;连钱草的几种用方[N];上海中医药报;2002年

相关博士学位论文 前3条

1 王强;连钱草预防草酸钙结石形成及其机制的研究[D];南京中医药大学;2017年

2 梁强;连钱草抗泌尿系草酸钙结石的药理作用及其机制研究[D];兰州大学;2017年

3 刘丽;活血丹种质资源及其药材品质评价[D];南京农业大学;2012年

相关硕士学位论文 前8条

1 张晶;连钱草活性多糖结构及迷迭香酸的代谢研究[D];江西中医药大学;2019年

2 张俊霞;连钱草多糖分离纯化、结构分析及生物活性初探[D];湖北民族学院;2017年

3 费蓉葆;三种地被植物抗旱性初步研究[D];东北林业大学;2007年

4 王柳;地被植物连钱草、蛇莓盐碱胁迫研究[D];东北林业大学;2008年

5 杨菁;连钱草定性鉴别、含量测定及指纹图谱研究[D];南京中医药大学;2012年

6 黄天赐;不同产地连钱草药材质量分析和比较的研究[D];湖北中医药大学;2013年

7 王杰青;地被植物连钱草和紫花地丁的研究[D];东北林业大学;2002年

8 渠云博;连钱草抑制植物病原菌活性成分的初步研究[D];中国农业科学院;2012年

本文编号：2724545