黄芪甲苷对游离脂肪酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制

发布时间：2020-06-21 20:07

【摘要】：第一部分目的:研究棕榈酸(PA)在HK-2细胞凋亡中发挥的作用以及黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)在PA诱导HK-2细胞凋亡中的保护作用,为ASIV在糖尿病肾病的防治中提供相关理论依据。方法:体外培养HK-2细胞,对其分组如下:牛血清白蛋白(BSA)对照组、PA组与ASⅣ不同剂量(10,20,40μmol/L)给药组。MTT法检测细胞活性;油红染色法观察细胞内脂质沉积情况;BODIPY?FL C16荧光染色观察细胞内脂质运输情况;Hoechst-33258、Annexin-V/FITC/PI双标记荧光显微镜观察细胞凋亡情况;ROS活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS表达情况;Western blot测定HK-2细胞内ATF4、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、p-Nrf2蛋白表达情况。结果:ASⅣ浓度在0-100μmol/L时对HK-2细胞生长没有明显影响;结果显示200μmol/L的棕榈酸能够诱导HK-2细胞的凋亡,增加细胞内脂质沉积,诱导细胞内氧化应激和内质网应激反应的发生。ASIV(10,20,40μmol/L)可以明显减少棕榈酸诱导的HK-2细胞的凋亡数目,降低细胞内脂质沉积,减少细胞内活性氧含量。棕榈酸诱导后HK-2细胞中内质网应激相关蛋白ATF4、CHOP表达升高,氧化应激相关蛋白p-Nrf2含量降低,凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase 3表达增加。而给予ASIV后,可以明显降低ATF4、CHOP、Bax、Cleaved-caspase 3含量,并升高p-Nrf2的含量。结论:ASⅣ能够抑制棕榈酸(PA)诱导HK-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ASⅣ能够降低凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3的含量,可以减少细胞内ROS的含量,升高HK-2细胞内Bcl-2和p-Nrf2的表达水平有关。第二部分目的:研究ASIV在保护HK-2细胞防止其凋亡的过程中,其发挥保护作用的具体机制。进一步探讨氧化应激和内质网应激在HK-2细胞凋亡过程中的作用。方法:体外培养HK-2细胞,对其分组如下:牛血清白蛋白(BSA)对照组、PA组、ASⅣ40μmol/L给药组、Tempol给药组以及4苯基丁酸(4-phenybutyric acid,4-PBA)给药组。MTT法检测细胞活性;Hoechst-33258、Annexin-Ⅴ/FITC/PI双标记荧光显微镜观察细胞凋亡情况;ROS活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS沉积情况;Western blot测定HK-2细胞内ATF4、CHOP、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、P-nrf2蛋白表达情况。结果:细胞给予Tempol或者4-PBA后均可改善细胞凋亡情况,减少细胞内凋亡相关蛋白的表达。氧化应激抑制剂Tempol,不仅能够降低细胞内ROS的含量,升高p-Nrf2蛋白含量,而且也能改变细胞中内质网应激相关蛋白的含量,减少内质网应激凋亡蛋白ATF4、CHOP的表达;同样我们发现内质网应激抑制剂4-PBA,不仅能够降低相关内质网应激相关蛋白含量,也能够改善细胞内氧化应激反应情况,降低细胞内ROS含量,并增加p-Nrf2蛋白的表达。结论:棕榈酸(PA)诱导HK-2细胞凋亡的机制可能与PA刺激后细胞内发生的氧化应激以及内质网应激反应有关。ASIV对PA诱导的HK-2细胞的损伤具有保护作用,ASIV的保护机制可能是由于ASIV能够降低氧化应激以及内质网应激的相关反应,从而起到细胞的保护作用。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

图 1 光学显微镜下观察各组细胞不同形态(200×)Fig.1 Cell morphology and viability test. (A): Normal cells. (B): BSA control cells. (C): PA 24 hours afterstimulation cells. (200×)

图 2. PA 和 ASIV 对 HK-2 细胞活力的影响(MTT 法)ffect of PA and ASIV on HK-2 cell viability (MTT). (A): The cytotoxicity of ASIV with difftrations, (B): The cytotoxicity of PA with different concentrations, (C): The protective effect of ASIell damage induced by PA. Data were expressed as mean ± SD, n=3,**p < 0.01,***p< 0.001 ve

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本文编号：2724573