五乙酰栀子苷对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及对成纤维样滑膜细胞的促凋亡作用

发布时间：2020-06-22 17:24

【摘要】：目的:类风湿关节炎(RA)发病机制迄今未明,成纤维样滑膜细胞(FLS)过度增殖和凋亡不足是RA发病和病情发展的重要原因,抑制FLS增殖诱导其凋亡是治疗RA的一个有效策略。栀子苷为栀子的主要有效成分,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性,然而栀子苷极性大,生物利用度非常低,且很难从栀子中有效的分离出来制备成单体,很大程度上限制了应用。五乙酰栀子苷((Ac)_5GP)是以栀子苷为母核进行衍生化后得到的活性化合物,其活性高于母核栀子苷,有文献报道(Ac)_5GP有诱导肿瘤细胞凋亡作用。本研究以佐剂性关节炎(AIA)大鼠和体外分离培养的AIA FLS为研究对象,研究(Ac)_5GP的可能抗风湿作用及其作用机制,为RA防治提供新的思路和药物靶标。方法:完全弗氏佐剂制备大鼠AIA模型,(Ac)_5GP(30,60,120 mg/kg)灌胃给药。分别测定足肿胀,多关节炎指数,促炎性细胞因子水平,踝关节组织学评估和蛋白多糖表达来评价(Ac)_5GP对AIA大鼠的治疗作用。免疫组化Ki67和TUNEL检测,揭示(Ac)_5GP在体内对AIA大鼠滑膜细胞的抗增殖和促凋亡作用。体外分离培养AIA FLS,(Ac)_5GP(50,100,200μM)体外给药。采用MTT法定量分析(Ac)_5GP对AIA FLS增殖的影响。采用Hoechst染色、DNA阶梯检测和流式细胞凋亡试验评价(Ac)_5GP对AIA FLS的促凋亡作用。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和caspase 3)和NF-κB信号通路关键分子(IκBα、P-IκBα和NF-κB p65)的表达水平。免疫荧光分析(Ac)_5GP对AIA FLS中NF-κB核易位的影响。结果:(Ac)_5GP体内给药能抑制AIA大鼠继发性足肿胀,降低多关节炎指数,降低血清TNF-a和IL-1β水平,减轻踝关节病变,促进蛋白聚糖表达。(Ac)_5GP体内给药也能降低Ki67阳性表达率,提高滑膜组织中滑膜细胞凋亡指数。(Ac)_5GP(120 mg/kg)显著降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,并降低Bcl-2与Bax的比值。此外,(Ac)_5GP(120 mg/kg)抑制了IκBα的降解和磷酸化,降低了核提取物中NF-κB p65的蛋白水平。在体外实验中,(Ac)_5GP体外给药能剂量依赖性抑制AIA FLS的增殖反应。Hoechst染色结果表明经(Ac)_5GP处理的AIA FLS显示典型的凋亡形态学特征。DNA ladder检测证实(Ac)_5GP对滑膜细胞凋亡的促凋亡作用。流式细胞凋亡检测表明(Ac)_5GP能显著提高AIA FLS的凋亡率。与体内结果相似,(Ac)_5GP体外给药能降低AIA FLS中Bcl-2蛋白表达、增加Bax和caspase 3蛋白表达;(Ac)_5GP体外给药能抑制AIA FLS中IκBα的降解和磷酸化,降低了核提取物中NF-κB p65的蛋白水平。免疫荧光分析表明(Ac)_5GP可通过抑制NF-κB p65核易位而抑制NF-κB的激活。结论:(Ac)_5GP(栀子苷活性衍生物)对AIA大鼠具有明显的治疗作用,其机制可能与抑制FLS增殖、诱导其凋亡,并抑制NF-κB通路有关。(Ac)_5GP体外给药能明显促进AIA FLS凋亡,该作用可能和调节凋亡相关蛋白的表达有关。(Ac)_5GP体外给药能抑制NF-κB p65的入核进而抑制NF-κB通路的活化。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

化学式,分子量,实验动物中心,周龄

GP 的结构（化学式：C27H34O15；分子量：Ac)5GP (Chemical formula: C27H34O15; Mole节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)观察了(Ac)5GP 对 AIA 大鼠的治疗Ac)5GP 的可能抗风湿作用机制。鉴于要作用，本研究进一步探讨了(Ac)5G些结果有助于阐明(Ac)5GP 在 RA 治学实验动物中心），雄性，2～3 周龄

影响数,血清,统计学意义,均值

0.1±0.3 0.2±0.4 0.2±0.4 0.2± 4.4±1.1##6.7±1.1##8.4±1.4##9.6±0 4.2±1.4 6.0±1.4 7.6±1.3 8.5±0 4.4±0.8 5.6±1.2 6.6±1.2 7.5±20 4.1±1.4 5.5±1.4 6.3±1.3*7.0±0 4.2±1.1 5.2±1.0 6.0±0.9**6.8±表示(n=10)，##p＜0.01，与正常组相比；*p<0.05,**pSD (n=10).##p<0.01 compared with normal control groucompared with AIAcontrol group. AIA 大鼠 TNF-α和 IL-1β水平，AIA 组的血清 TNF-α和 IL-1β水平明显高于相比，血清 TNF-α和 IL-1β水平呈剂量依赖性下IA 对照组相比差异有统计学意义。作为阳性 TNF-α和 IL-1β的生成。

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