益气养阴方含药血清对肺癌A549细胞的休眠作用研究

发布时间：2020-06-23 11:18

【摘要】：目的:通过研究益气养阴方含药血清对非小细胞肺癌A549细胞株的增长抑制、细胞周期改变、PCNA mRNA和蛋白表达以及VEGF mRNA和蛋白表达的影响,探讨其诱导肿瘤休眠的机制。方法:20只SD大鼠随机分为4组,对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组5只。将益气养阴方熬煮浓缩,中剂量为等效剂量,即每天需给与生药量10.26 g/100g大鼠;高剂量乘以1.5,即每天需给与生药量15.39 g/100 g大鼠;低剂量除以1.5,即每天需给与生药量6.84 g/100 g大鼠。对照组给予等量生理盐水,连续灌胃3天。末次给药后2 h采眼眶血,分离出含药血清,将采自同组5只小鼠的血清进行充分混合。A549细胞经24 h预培养进入对数生长期后,将对照组、高、中、低剂量组含药血清分别加入培养基继续培养24 h。用CCK-8法检测细胞抑制率,流式细胞技术检测细胞周期,荧光定量PCR技术检测PCNA、VEGF mRNA表达水平,Western blotting技术检测PCNA、VEGF蛋白表达水平。结果:1、细胞增殖抑制作用实验:高、中、低剂量组与对照组相比均有抑制作用,差异具有统计学意义(P(27)0.01),高、中、低剂量组抑制率分别为46.09%、57.45%、70.27%。2、细胞周期阻滞实验:与对照组相比,用不同剂量含药血清处理A549细胞后G0/G1期细胞比例均有所升高,差异均有统计学意义(P(27)0.05),高、中、低剂量组作用A549细胞后细胞分裂周期停滞在G0/G1期。3、PCNA mRNA和蛋白质表达水平检测:与对照组相比,低、中剂量组PCNA mRNA表达量都有降低,差异有统计学意义(P(27)0.05),高剂量处理组作用后PCNA mRNA表达量略有升高,但差异无显著性(P(29)0.05)。与对照组相比,各剂量含药血清处理组PCNA蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义(P(27)0.01)。4、VEGF mRNA和蛋白质表达水平检测:与对照组相比,中、低剂量益气养阴方含药血清各剂量处理组对A549细胞内VEGF mRNA表达没有明显的影响(P(29)0.05),而高剂量处理组的细胞内VEGF蛋白相对表达升高,差异有统计学意义(P(27)0.01)。结论:适当浓度的益气养阴方可能通过降低PCNA的表达抑制细胞增殖,诱导A549细胞进入细胞休眠状态。益气养阴方诱导A549细胞休眠的作用可能与下调血管生成途径的VEGF因子无关。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R285.5
【图文】：

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益气养阴方含药血清对肺癌 A549 细胞的休眠作用研究第三章结果3.1A549 细胞的最佳生长时间应用 CCK-8 法检测 NSCLC A549 细胞 48 h 内的增殖状态。根据 C显示：A549 细胞从 6 h 到 48 h 均处于持续生长阶段，24 h 到 48 h 为生长（图 1），故后续实验加药时间均选在 24 h。

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C图 2 流式细胞技术检测益气养阴方含药血清对 A549 细胞分裂周期的影响。Figure 2 Flow cytometry analysis on the effect of the serum containing Yiqi Yangyindecoction onA549 cells division cycle.注：A、B、C、D 分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各组 G0/G1 期细胞占比。Note:A, B, C, and D are the control group, low-dose group, middle-dose group, high-dose group,respectively, G0/G1 phase cell proportion.表 9 不同益气养阴方含药血清处理组 G0/G1 期 A549 细胞的百分数（ x ± s，n=3）Table 9 Percentage ofA549 cells in G0/G1 phase treated with different doses of Yiqi Yangyin decoctiocontaining serum ( x ± s, n=3)组别 G0/G1 期细胞占比（％）对照组 58.885 ± 0.225低剂量组 61.515 ± 0.185*#中剂量组 61.345 ± 0.185*#D

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